ICS 11.120.20 C 30 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5127.3—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中 有毒有害物质的测定 第 3 部分：葡萄糖迁 移量 碘量法 2019 - 12 - 27 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 01 - 28 实施 发 布 DB13/T 5127.3—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5127《植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定》共分16个部分： ——第1部分：柠檬酸钠和乙二胺四乙酸二钾迁移量 原子吸收分光光度法； ——第2部分：二巯基丙醇迁移量 碘量法； ——第3部分：葡萄糖迁移量 碘量法； ——第4部分：柠檬酸迁移量 酸碱中和滴定法； ——第5部分：硫氰酸胍迁移量 分光光度法； ——第6部分：丙酮迁移量 气相色谱法； ——第7部分：丙交酯迁移量 气相色谱法； ——第8部分：对苯二甲酸迁移量 高效液相色谱法； ——第9部分：乙醇迁移量 气相色谱法； ——第10部分：环氧乙烷迁移量 气相色谱法； ——第11部分：戊二醛迁移量 高效液相色谱法； ——第12部分：异氰酸酯迁移量 高效液相色谱法； ——第13部分：甲醛迁移量 气相色谱质谱联用法； ——第14部分：蛋白质迁移量 可见-紫外分光光度法； ——第15部分：铅、砷、镉、铬、铜、锑、钡、铝、锌、锡迁移量 电感耦合等离子体质谱法； ——第16部分：生物负载 薄膜过滤法。 本部分为DB13/T 5127的第3部分。 本部分由河北省药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院。 本部分主要起草人：杨光、刘若锦、刘华、王丽、尹紫明。 I DB13/T 5127.3—2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定 第 3 部分：葡萄糖迁移量 碘量法 1 范围 本标准规定了植入性医疗器械高分子材料浸提液中葡萄糖迁移量的碘量法的测定方法。 本标准适用于植入性医疗器械高分子材料浸提液中葡萄糖迁移量的测定。 本方法葡萄糖的检出限为0.03 mg/mL。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 16886.12 医疗器械生物学评价 第12部分：样品制备与参照材料 3 方法原理 - - 在碱性条件下将过量的碘单质(I2)加入葡萄糖溶液中，碱液中OH 与I2作用可生成IO ，而葡萄糖分 子中的醛基定量地被次碘酸负离子氧化为葡萄糖酸，反应如下：在酸性条件下过量的未与葡萄糖反应 的IO 在碱性介质中进一步歧化为IO3 和I ，在加酸酸化时又重新氧化生成I2；用硫代硫酸钠(Na2S2O3)标 准溶液滴定析出的I2；按照加入的I2标准溶液的量以及滴定消耗的Na2S2O3标准溶液的量，计算出葡萄糖 的含量。 4 试剂与材料 除另有规定外，所用的试剂应为优级纯，试验用水应符合GB/T 6682规定的二级水的要求。 4.1 硫代硫酸钠标准溶液（0.1 mol/L）。 4.2 碘标准滴定液（0.05 mol/L）。 4.3 氢氧化钠溶液（2 mol/L）。 4.4 盐酸溶液（6 mol/L）。 4.5 淀粉指示剂液（10 g/L）。 5 仪器与设备 5.1 棕色碱式滴定管。 1 DB13/T 5127.3—2019 5.2 刻度移液管。 5.3 容量瓶。 5.4 具塞锥形瓶。 6 试液制备 6.1 浸提试验 6.1.1 浸提溶液 本标准采用模拟浸提方式，以水为浸提介质。 6.1.2 浸提条件和方法 6.1.2.1 浸提条件建立在通常可行并经论证为一个标准化方法的基础之上，在多数情况下为产品使用 的适当加严的条件。应在下列之一的条件下进行浸提： a) (37±1)℃,(24±2) h； b) (37±1)℃,(72±2)h； c) (50±2)℃,(72±2) h； d) (70±2)℃,(24±2) h； e) (121±2)℃,(1±0.1)h。 6.1.2.2 可用标准表面积确定所需的浸提介质的体积。标准表面积包括样品两面面积的总和，不包括 不确定和不规则面积。当由于样品外形不能确定其表面积时，应使用质量/浸提液体积。见表1。 表1 标准表面积和浸提液体积 厚度 浸提比例 （mm） （表面积或质量/体积）±10% 膜、薄片、管壁 ＜0.5 6 cm / mL 管壁、厚板、小型模制件 0.5～1.0 3 cm / mL 大型模制件 ＞1.0 3 cm / mL 弹性密封件 ＞1.0 1.25 cm / mL 粉剂、球体、泡沫材料、无吸收性模制件 不规则形状固体器械 0.2 g/ mL 薄膜、织物 不规则形状多孔器械（低密度材料） 0.1 g/ mL 材料形态举例 2 2 2 2 注1：现在尚无测试吸收剂和水胶体的标准化方法，推荐以下方案： 2 注2：测定材料浸提介质吸收量（每0.1 g或1.0cm 材料所吸收的量）； 2 注3：在进行浸提时，对浸提混合物按每0.1 g或1.0 cm 额外加入该浸提介质吸收量。 6.1.2.3 对于弹性体、涂层材料、复合材料、多层材料等，由于完整表面与切割表面存在潜在的浸提 性能差异，因此应尽量完整地进行浸提。 6.2 标准工作液制备 精密称取约1.000 g葡萄糖于100 mL容量瓶中，试验用水定容，摇匀。制得约10 mg/mL葡萄糖储备 液。 2 DB13/T 5127.3—2019 制备葡萄糖标准溶液，浓度分别为0.20 mg/mL、0.50 mg/mL、1.00 mg/mL、2.00 mg/mL、3.00 mg/mL、 4.00 mg/mL。 6.3 空白液制备 以同批浸提介质作为空白试验液。 7 测定 7.1 标准曲线测定 移取25.00 mL空白液或标准溶液于碘量瓶中，从移液管准确加入25.00 mL 0.05 mol/L的碘标准溶 液。一边摇动，一边缓慢加入2 mol/L NaOH溶液，直至溶液呈浅黄色。将碘量瓶加塞于暗处放置10 min～ 15 min后，加2 mL 6mol/L HCl使溶液成酸性，立即用Na2S2O3溶液滴定至溶液呈淡黄色时，加入2 mL 淀粉指示剂，继续滴定蓝色消失即为终点。记录消耗溶液的体积。 7.2 样品测定 取样品5支，以水为浸提介质制备浸提液。移取25.00 mL浸提液于碘量瓶中，从移液管准确加入 25.00 mL 0.05 mol/L的碘标准溶液。一边摇动，一边缓慢加入2 mol/L NaOH溶液，直至溶液呈浅黄色。 将碘量瓶加塞于暗处放置10 min～15 min后，加2 mL 6mol/L HCl使溶液成酸性，立即用Na2S2O3溶液滴 定至溶液呈淡黄色时，加入2 mL淀粉指示剂，继续滴定蓝色消失即为终点。记录消耗溶液的体积。 8 结果计算 浸提液中葡萄糖的含量按公式（1）计算。 ………………………………………………（1） 式中： C——浸提液中葡萄糖的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）； y ——浸提液消耗碘标准溶液(0.05 mol/L)的体积（mL）； a ——回归曲线的斜率； b ——回归曲线的截距； ρ ——稀释倍数。 样品中葡萄糖的特定迁移量按公式（2）计算。 M  C A  1000 …………………………………………（2） 式中： 2 M ——特定迁移量，mg/cm 或 mg/g； A ——浸提比例，cm2/ mL或g/mL。 计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 确证 3 DB13/T 5127.3—2019 当浸提液中检出葡萄糖时，用附录A高效液相色谱法进行确证。 10 精密度 浸提液中目标物在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 4 DB13/T 5127.3—2019 附 录 A (规范性附录) 高效液相色谱法 A.1 原理 试样中的葡萄糖利用高效液相色谱柱分离,用示差折光检测器或蒸发光散射检测器检测,外标法进 行定量。 A.2 仪器与设备 A.2.1 A.2.2 A.2.3 A.2.4 A.2.5 A.2.6 电子天平：精度为 0.1 mg。 超声波振荡器。 磁力搅拌器。 离心机：转速≥4000 r/min。 高效液相色谱仪,带示差折光检测器或蒸发光散射检测器。 液相色谱柱:氨基色谱柱，柱长 250 mm，内径 4.6 mm，膜厚 5 μm 或具有同等性能的色谱柱。 A.3 浸提液处理 量取50.0 mL浸提液移入100 mL容量瓶中,缓慢加入乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液各5 mL,定容至刻 度,摇匀,静置30 min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,后续滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤或离心获取上清 液过0.45 μm 微孔滤膜至样品瓶，供液相色谱分析。 A.4 色谱参考条件 根据所用仪器型号选择最佳测定条件。色谱条件应当满足葡萄糖的分离度大于1.5。 参考条件：流动相:乙腈+水= 70+30(体积比)；流动相流速:1.0 mL/min；柱温:40 ℃；进样量:20 μ L；示差折光检测器条件:温度40 ℃；蒸发光散射检测器条件：漂移管温度：80 ℃～90 ℃；氮气压 力：350 kPa；撞击器：关。 A.5 标准曲线的测定 将葡萄糖标准工作液按上述推荐色谱条件依次上机测定，记录色谱图峰面积或峰高，以峰面积或 峰高为纵坐标，以标准工作液的浓度为横坐标，示差折光检测器采用线性方程；蒸发光散射检测器采 用幂函数方程绘制标准曲线。 A.6 样品测定 将处理后的浸提液注入高效液相色谱仪中，记录峰面积或峰高，从标准曲线中查得试样溶液中葡 萄糖的浓度。 _________________________________ 5