ICS 11.220 B 41 备案号： 江 DB32 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 3592-2019 兔出血症防控技术规程 Technical regulation of prevention and controlfor rabbit hemorrhagic disease 2019 - 04 - 08 发布 江苏省市场监督管理局 2019 - 04 - 30 实施 发 布 DB32/T 3592-2019 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则编制。 本标准由江苏省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：江苏省农业科学院兽医研究所 本标准主要起草人：王芳、魏后军、范志宇、胡波、宋艳华、陈萌萌、薛家宾。 I DB32/T 3592-2019 兔出血症防控技术规程 1 范围 本标准规定了兔出血症的预防、诊断和疫情控制等要求。 本标准适用于兔出血症的预防、实验室诊断、临床诊断、流行病学调查和兔出血症暴发后的疫情控 制，也适用于分离毒株的鉴定和对无特定病原体(SPF)兔的监控。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法 NY/T 572 兔病毒性出血病血凝和血凝抑制试验方法 NY/T 3075 畜禽养殖场消毒技术 NY 5131 无公害食品 肉兔饲养兽医防疫准则 DB32/T 1458 兔出血症病毒的检测 RT-PCR方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 兔出血症病毒 rabbit hemorrhagic disease virus（RHDV） 杯状病毒科（Caliciviridae）、兔病毒属（Lagovirus）病毒。含有一条单股正链RNA，由7437个核 苷酸组成，只有2个开放阅读框架(ORF)，并由ORF1的3′端部分序列编码RHDV衣壳蛋白VP60，其基因 片段长度为1740 bp，共编码579个氨基酸。 3.2 兔出血症 rabbit hemorrhagic disease（RHD） 由兔出血症病毒引起的一种以急性、高度传染性、大面积死亡为特征的兔传染病。 4 预防 4.1 生物安全管理 4.1.1 养殖场条件 养殖场应符合 NY 5131规定的条件。 4.1.2 隔离 应对引进家兔进行隔离观察15d～30d，经检查健康合格后，方可将引进家兔与本场家兔一起饲养。 4.1.3 清扫和清洗 1 DB32/T 3592-2019 应对兔舍、车辆等用具、笼具等设备、兔场环境等进行定期清扫和清洗。 4.1.4 消毒 可参照 NY/T 3075-2017进行。养殖场应建立严格的卫生（消毒）管理制度，并定期对兔舍、车辆 等用具、笼具等设备、饮水及兔场环境等进行定期严格消毒；兔场出、入口处应设置消毒池，内置有效 消毒剂；兔舍门口应设置消毒盆、消毒垫等，并放置消毒剂。 4.1.5 防鼠、防虫、防蝇 兔舍内应有防鼠、防虫、防蝇等装置。 4.2 免疫监测 定期随机采集兔场家兔血液样品，制备血清，用红细胞凝集抑制试验（HI）检测血清中RHDV抗体， 具体方法可参照NY/T 572-2016进行。如群体血清阳性率低于85%，应实施疫苗免疫接种。 4.3 免疫接种 4.3.1 疫苗 应使用经兽医主管部门批准使用的含有兔出血症病毒抗原的疫苗。 4.3.2 免疫程序 一般情况下，应按疫苗的使用说明书规定的程序进行免疫，也可参照附录A实施。 5 诊断 5.1 诊断流程 依据兔出血症流行病学特点、临床症状、病理学变化做出初步诊断,然后经病原学检验进行确诊。 5.2 流行病学特点 兔出血症流行病学有以下特点： a) 易感动物 该病仅感染兔。小于5周龄的兔子感染后不易死亡，无明显临床症状； 2月龄以上家 兔感染后，死亡率高达70%～90%。 b) 传染源 感染RHDV的兔子是主要的传染源，包括感染病死兔和带毒未死的兔子。 c) 传播途径 病毒通过直接和间接途径传播。病死兔和带毒兔通过其排泄物、分泌物、血液、兔 毛等污染饮水、饲料、用具、笼具、空气等，引起易感兔发病和疫病流行。人、鼠、蚊、蝇和其它畜禽 等也可机械性地传播病毒。 5.3 临床症状 兔出血症有以下临床症状： a) 最急性型 常发生在非疫区或流行初期。患兔死前无任何明显症状，常表现为突然死亡，死后 勾头弓背或“角弓反张”，少数兔鼻孔流出带有泡沫的血液。 b) 急性型 病程一般 12 h～48 h，患兔精神萎顿、不爱活动、食欲减退、喜饮水、呼吸迫促、体 温达 41℃。临死前表现狂躁，倒地后，四肢划动，抽搐或惨叫，很快死亡。少数死兔鼻孔流出少量带 有泡沫的血液。 c) 亚急性型 多发于 2 月龄以内的幼兔，兔体消瘦，被毛焦枯无光泽，病程 2 d～3d 或更长，随 后死亡。 5.4 病理学变化 2 DB32/T 3592-2019 最急性、急性病死兔剖检时可见全身实质器官淤血、出血。气管软骨环淤血，气管内含带有泡沫的 血液；胸腺水肿，并有大小不等的出血点；肺脏出血、淤血、水肿、有大小不等的出血点；肝脏淤血、 肿大、质地变脆、色泽变淡；脾脏肿大、淤血，呈黑紫色；肾脏淤血、出血；十二指肠、空肠粘膜出血。 5.5 病原学检验 5.5.1 样本采集、保存和运输 样本采集、保存和运输参照NY/T 541-2016执行，并按照GB 16548处理病死家兔。 5.5.2 红细胞凝集试验（HA） 红细胞凝集试验可参照NY/T 572-2016进行。 5.5.3 核酸识别技术—RT-PCR 方法 核酸识别技术可参照DB 32/T 1458-2009 进行。 5.5.4 非免疫兔接种技术 非免疫兔接种技术参见附录B。 5.6 结果判定 5.6.1 疑似兔出血症 符合5.2和5.3或/和5.4的。 5.6.2 确诊 符合5.6.1且符合5.5.2或者5.5.3或者5.5.4的。 6 疫情控制 6.1 隔离封锁 发生兔出血症时，应紧急隔离封锁发病兔场，严禁兔场人员，特别是饲养及管理人员互相串舍，同 时严禁家兔相关物品流通。 6.2 消毒 应对病毒污染和可能被污染的一切场所、用具和物品等进行清洁、消毒，并对养殖场实施灭鼠、灭 蚊蝇等防控措施。 6.3 病死家兔处理 按照 GB 16548处理病死家兔。 6.4 紧急接种 当发生兔出血症时，应对其他未死亡家兔进行紧急预防接种。用经兽医主管部门批准使用的含有兔 出血症病毒抗原的疫苗，2～4 倍剂量/只，颈部皮下注射或用兔出血症病毒高免血清，4 毫升～6 毫升/ 只，颈部皮下注射，7 天～10 天后，再注射一次。 3 DB32/T 3592-2019 附录 A （规范性附录） 免疫程序 A.1 繁殖种兔群 A.1.1 繁殖母兔 应每年 2 次定期免疫接种。 a) 用符合规定的疫苗，2 倍剂量/只，颈部皮下注射； b) 6 个月后，用符合规定的疫苗，2 倍剂量/只，颈部皮下注射。 A.1.2 种公兔 应每年 2 次定期免疫接种。 a) 用符合规定的疫苗，1 个剂量/只，颈部皮下注射； b) 6 个月后，用符合规定的疫苗，1 个剂量/只，颈部皮下注射。 A.2 非繁殖青年、成年兔群 应每年 2 次定期免疫接种。 a) 用符合规定的疫苗，1 个剂量/只，颈部皮下注射； b) 6 个月后，用符合规定的疫苗，1 个剂量/只，颈部皮下注射。 A.3 肉兔 A.3.1 70 日龄出栏的肉兔 在家兔 35 日～40 日龄时，用符合规定的疫苗，2 倍剂量/只，颈部皮 下注射。 A.3.2 70 日龄以上出栏的肉兔 a) 在家兔 35 日～40 日龄时，用符合规定的疫苗，2 倍剂量/只，颈部皮下注射； b) 在家兔 60 日～65 日龄时，用符合规定的疫苗，1 个剂量/只，颈部皮下注射。 A.4 仔、幼兔 a) 35 日～40 日龄 用符合规定的疫苗，2 倍剂量/只，颈部皮下注射； b) 60 日～65 日龄 用符合规定的疫苗，1 个剂量/只，颈部皮下注射。 4 DB32/T 3592-2019 附录 B （规范性附录） 非免疫兔接种技术 B.1 材料 B.1.1 实验动物 2 月龄以上未免疫兔出血症疫苗的临床健康家兔，兔出血症病毒抗体 HI 效价≦ 1:2。 B.1.2 兔出血症病死兔肝脏悬液 取肝脏组织，剪碎，按1:10加入PBS，匀浆，反复冻融3次，于 -20℃保存备用。 B.1.3 疑似兔出血症病死兔肝脏悬液 处理方法同 B.1.2。 B.2 接种方法 用兔出血症病死兔肝脏悬液颈部皮下注射实验动物5只，1mL/只，作为阳性对照组；用疑似兔出血 症病死兔肝脏悬液颈部皮下注射实验动物5只，1mL/只，作为疑似样品组，同时设立不接种肝脏组织的 实验动物5只，作为阴性对照组，分别于隔离器中饲养，观察7日，记录试验兔临床症状、死亡情况和病 理学变化，并采集病死兔肝脏样品做红细胞凝集（HA）试验，具体方法参照NY/T 572-2016进行。 B.3 结果判定 在观察期内，阳性对照组至少死亡4只，死亡兔有兔出血症典型的临床症状和病理学变化，肝脏样 品HA检验为阳性；阴性对照组全部健康存活，证明实验动物的可靠性；疑似样品组，在观察期内，至 少死亡4只，死亡兔有兔出血症典型的临床症状和病理学变化，肝脏样品HA检验为阳性者，则疑似样品 来自兔出血症死亡兔。 _________________________________ 5