ICS 65.150 B 51 DB45 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 45/T 1651—2017 珠母贝人工繁殖技术规范 Technnical specifications for artificial propagation of Pinctada margartifera 2017 - 12 - 30 发布 广西壮族自治区质量技术监督局 2018 - 01 - 30 实施 发 布 DB45/T 1651—2017 目 次 前 言 ............................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 繁殖场海区环境 .................................................................... 1 5 亲贝选择 .......................................................................... 1 6 催产与人工授精 .................................................................... 2 7 幼虫筛选与孵化 .................................................................... 2 8 幼虫培育 .......................................................................... 3 9 采苗 .............................................................................. 4 10 收苗 ............................................................................. 4 I — DB45/T 1651 2017 II — DB45/T 1651 2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由北海市质量技术监督局提出。 本标准由广西珍珠及珍珠制品标准化技术委员会技术归口。 本标准起草单位：国家珍珠及珍珠制品质量监督检验中心、广东海洋大学。 本标准主要起草人：廖斌、童银洪、关安春、阮然、刘永、苏珠芳、陈虹才、邓晶晶、梁耀娟、沈 子洋。 III — DB45/T 1651 2017 珠母贝人工繁殖技术规范 1 范围 本标准规定了珠母贝（Pinctada margaritifera（Linne））人工繁殖的环境条件、亲贝选择、催产 与人工授精、幼虫筛选与孵化、幼虫培育、采苗与收苗技术。 本标准适用于广西境内珠母贝的人工繁殖。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 11607 渔业水质标准 NY 5052 无公害食品 海水养殖用水水质 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 洗卵 egg-washing 在珠母贝胚胎发育的沉降期内，去掉上层海水以降低劣质胚体比例和减少水体中多余精子、亲贝排泄 物等杂质，达到净化水质、保留优质胚体的过程。 3.2 幼虫筛选 embryo selection 在珠母贝胚胎发育至担轮幼虫期，收集和利用上浮的优质幼虫，淘汰中下层劣质幼虫，以降低劣质幼 虫比例的过程。 4 繁殖场海区环境 应选择在潮流畅通、底质为沙或沙泥、没有污染的海区；盐度25‰～35‰；pH值8.0～8.6。水质应符 合GB 11607和NY 5052 的规定。 5 亲贝选择 亲贝选择如下： ——珠母贝亲体为 3 龄～5 龄天然贝； ——壳高 10 cm 以上、体重 50 g 以上； 1 — ——贝壳外观完整，边缘生长线明显，体色黑褐色，外缘鳞片粗壮、完整； ——贝壳内侧边缘珍珠质呈深黑色或孔雀绿色； ——软体部饱满、富有弹性。 DB45/T 1651 2017 6 催产与人工授精 6.1 催产 6.1.1 温度刺激法 将亲贝置于18 ℃～20 ℃环境中30 min～50 min，再将亲贝置于29 ℃～30 ℃的海水中浸泡20 min～30 min，然后移入23 ℃～26 ℃海水中。按4：1～5：1的雌雄比将亲贝移入产卵池或孵化池中待排放精卵。 6.1.2 温度结合化学药物刺激法 把亲贝阴干2 h～3 h，再置于浓度为4×10 ～6×10 、温度为29 ℃～30 ℃的氨海水浸泡30 min～40 min， 然后移入23 ℃～26 ℃的砂滤海水。按4：1～5：1的雌雄比将亲贝移入产卵池或孵化池中待排放精卵。 -4 -4 6.1.3 阴干结合藻液、温度刺激法 把亲贝阴干1 h～2 h，再置于阳光下暴晒20 min，然后置于10 万cell～20 万cell的扁藻或金藻液中滤 食20 min～30 min，按4：1～5：1的雌雄比将亲贝移入产卵池或孵化池中待排放精卵。 6.2 人工授精 6.2.1 受精环境 水温26 ℃～30 ℃，盐度28‰～32‰。 6.2.2 精卵成熟度检查 去除亲贝右壳、外套膜和鳃使生殖腺裸露，用消毒脱脂棉擦去体液和海水。用吸管刺入生殖腺吸取精 卵，置于3×10 ～5×10 的氨海水中，在显微镜下观察：精子活动活泼则为成熟精子；成熟的卵子呈淡黄 色，圆形或卵圆形，卵膜光滑，卵核大而明显，位于细胞中央，卵黄颗粒分布均匀，色素较浓，卵径50 μ m～60 μm。 -5 -5 6.2.3 授精 在100 mL～200 mL烧杯中装好砂滤海水，用吸管分别吸取雌、雄亲贝的卵子、精子于烧杯中。在受精 缸或水族箱中配好6×10 ～8×10 的氨海水。精、卵用筛绢过滤，先倒入卵子，过5 min～10 min后倒入精 子，并充分搅拌混合。光学显微镜下观察卵子受精情况，受精率在90%以上则用于人工繁殖，受精率在90% 以下则弃之不用。 -5 -5 7 幼虫筛选与孵化 7.1 洗卵 在胚胎发育的沉降期时间（受精后3 h）内，每隔30 min～50 min进行一次洗卵操作，共洗卵2次至3次。 7.2 幼虫筛选 2 — 胚胎发育5 h后进入担轮幼虫期，每隔1小时收集一次上浮的优质幼虫并入孵化池，共收集3次。 DB45/T 1651 2017 7.3 孵化 孵化池中担轮幼虫密度控制在50个/mL～100个/mL之间。暂养12 h后，胚体发育至面盘幼虫。 8 幼虫培育 8.1 幼虫投放 幼虫移入加有1米左右水深砂滤海水的育苗池，使幼虫密度为2个/mL ～3个/mL。育苗池水温23 ℃～ 26 ，盐度25‰～33‰。 将 ℃ 8.2 水质管理 育苗池幼虫下池后的3 d～4 d内，每天添加一部分新鲜砂滤海水，第三天或第四天加满，然后开始换 水。换水量从初期的1/5到后期的1/3～1/2，换水时温差不能超过1 ℃。前期换水用孔径64 μm的尼龙筛绢 再过滤。 8.3 投饵 8.3.1 饵料种类 幼虫期饵料种类：光合细菌、干酵母、湛江等鞭金藻、球等鞭金藻、绿色巴夫藻、亚心形扁藻。 壳 期幼虫、眼点期幼虫饵料种类：在面盘幼虫期饵料种类中增加角毛藻。 幼苗饵料种类：光合细菌、干酵母、湛江等鞭金藻、球等鞭金藻、绿色巴夫藻、亚心形扁藻、角 毛藻。 面盘 顶 附着 8.3.2 投饵量 不同发育阶段的投饵量见表1。 表1 珠母贝幼体不同发育阶段的饵料量参考表 发育阶段 每天投饵量，cell/mL 亚心形扁藻 湛江等鞭金藻 D 形期 200～400 200～400 壳顶初期 400～800 400～800 壳顶中期 800～1 100 500～800 壳顶后期 1 100～1 500 600～900 附着和幼苗 1 500～2 000 1 000～2 000 幼苗至收苗 2 000～3 000 —— 注1：饵料主要以金藻和扁藻为主，其他饵料为辅（金藻、扁藻供应不足时使用）。 注2：D 形期以金藻为主，占投喂量的 50%～100%，其他发育时期以扁藻为主，比例占投喂量的 50%～ 100%。 8.4 充气 用空气压缩机或鱼泵连续充气，溶解氧保持4.30 mg/L以上。 3 — DB45/T 1651 2017 9 采苗 9.1 附苗器种类 9.1.1 塑料薄板 材质为聚氯乙烯，颜色为黑色或红色，规格为18 cm×20 cm、18 cm×22 cm、20 cm×2 0 cm，穿连成串， 每串10片～13片，片与片之间间隔10 cm～15 cm。 9.1.2 胶丝网布 将材质为聚氯乙烯的40目胶丝网布裁剪成110 cm×25 cm，一端中间绑吊绳，另一端两角绑坠子。 9.1.3 附着绳 采用遮光率95%的太阳遮光网裁剪成110 cm×3 cm，拧成绳子，一端绑坠子。 9.2 附苗器消毒 投放前淡水浸泡2 d～3 d，高锰酸钾消毒，淡水冲洗后备用。 9.3 附苗器投放 20%～30%的幼虫出现眼点时，投放附苗器，2 d～3 d内分批投完。 9.4 附苗后管理 每天换水1/3；连续充气；投饵量参照8.3.2。 10 收苗 附着后20 d～30 d，贝苗壳高达2 mm～3 mm就可收苗。对于塑料板或胶丝网布附苗器上的贝苗，采用 0.02%～0.025%氨海水浸泡12 min～15 min，贝苗会自动脱落，即可收集；对于附着绳附苗器上的贝苗，将 贝苗连同附着绳一起直接移至海区进行养成。 _________________________________ 4 中华人民共和国广西地方标准 珠母贝人工繁殖技术规范 DB45/T 1651―2017 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究