(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210464714.2 (22)申请日 2022.04.29 (71)申请人 苏州天隆生物科技有限公司 地址 215123 江苏省苏州市苏州工业园区 金鸡湖大道99 号纳米城西北区7栋501 室 (72)发明人 李红东　范亮波　邓波　王鸿　 石欣　张浩奇　 (74)专利代理 机构 成都九鼎天元知识产权代理 有限公司 51214 专利代理师 胡东东 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 一种用于人类ApoE/SLCO1B1基因位点的引 物、 试剂盒及识别方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于人类ApoE/SLCO1B1 基因位点的引物、 试剂盒及识别方法， 其中引物 包含ApoE基因(c.388T>C)位点的野生型引物， ApoE基因(c.526C >T)位点的野 生型引物， ApoE基 因(c.388T>C)位点的突变型引物， ApoE基因 (c.526C>T)位点的突变 型引物， 通过APOE基因不 同位点的扩增引物设计， 可以实现对于不同位点 的基因属于野生型还是突变型能够准确分类， 进 一步设计SLCO1B1基因位点的引物， 保证了引物 能够高效且高质量地识别出不同基因的位点类 型， 进而能够给出 更为准确的基因型 数据。 权利要求书2页 说明书14页 附图4页 CN 114717306 A 2022.07.08 CN 114717306 A 1.一种用于人类ApoE基因位点的核酸检测引物， 其特征在于， 包含ApoE基因c.388T>C 位点的野生型引物， ApoE基因c.526C>T位点的野生型引物， ApoE基因c.388T>C位点的突变 型引物， ApoE基因c.526 C>T位点的突变型引物。 2.如权利 要求1所述的用于人类ApoE基因位点的核酸检测引物， 其特征在于， 所述ApoE 基因c.388T>C位点的野生型与突变型的反向引物 为相同序列的反向共用型引物， 所述ApoE 基因c.526 C>T位点的野生型与突变型的正向引物为相同序列的正向共用型引物。 3.如权利要求1用于人类ApoE基因位点的核酸检引物， 其特征在于， 所述ApoE基因 c.388T>C位点的野生型引物包含序列为SEQ  ID NO.1的正向野生型引物， 所述ApoE基因 c.526C>T位点的野生型引物包含序列为SEQ  ID NO.5的反向野生型引物， 所述ApoE基因 c.388T>C位点的突变型引物包含序列为SEQ  ID NO.2的正向突变型引物， 所述ApoE基因 c.526C>T位点的突变型引物包 含序列为SEQ  ID NO.6的反向突变型引物。 4.如权利要求2或3所述的用于人类ApoE基因位点的核酸检测引物， 其特征在于， 所述 ApoE基因c.388T>C位点的反向共用型引物包含序列为SEQ  ID NO.3的反向共用引物， 所述 ApoE基因c.526 C>T位点的正向共用型引物包 含序列为SEQ  ID NO.7的正向共用引物。 5.一种用于人类ApoE基因与SLCO1B1基因位点的核酸检测引物， 其特征在于， 包含上述 权利要求1 ‑4任一所述的用于人类ApoE基因位点的核酸检测引物， 还包含SLCO1B1基因 c.388A>G位点的野生型引物， SLCO1B1基因c.521T>C位点的野生型引物， SLCO1B1基因 c.388A>G位点的突变型引物， SLCO1B1基因c.521T>C位 点的突变型引物。 6.如权利 要求5所述的用于人类ApoE基因与SLCO1B1基因位点的核酸检测引物， 其特征 在于， 所述ApoE基因c.388T>C位点的野生型与突变型的反向引物 为相同序列的反向共用型 引物， 所述ApoE基因c.526C>T位点的野生型与突变型的正向引物 为相同序列的正向共用型 引物， 所述SLCO1B 1基因c.388A>G位点的野生型与突变型的反向引物为相同序列的反向共 用型引物， 所述SLCO1B1基因c.521T>C位点的野生型与突变型的反向引物为相同序列的反 向共用型引物。 7.如权利 要求5所述的用于人类ApoE基因与SLCO1B1基因位点的核酸检测引物， 其特征 在于， 所述ApoE基因c.388T>C位点的野生型引物包含序列为SEQ  ID NO.1的正向野生型引 物， 所述ApoE基因c.526C>T位点的野生型引物包含序列为SEQ  ID NO.5的反向野生型引物， 所述ApoE基因c.388T>C位点的突变型引物包含序列为SEQ  ID NO.2的正向突变型引物， 所 述ApoE基因c.526C>T位点的突变型引物包含序列为SEQ  ID NO.6的反向突变型引物， 所述 SLCO1B1基因c.388A>G位点的野生型引物包含序列为SEQ  ID NO.9的正向野生型引物， 所述 SLCO1B1基因c.521T>C位点的野生型引物包含序列为SEQ  ID NO.13的正向野生型引物， 所 述SLCO1B1基因(c.388A>G)位点的突变型引物包含序列为SEQ  ID NO.10的正向突变型引 物， 所述SLCO1B1基因c.521T>C位点的突变型引物包含序列为SEQ  ID NO.14的正向突变型 引物。 8.如权利 要求6所述的用于人类ApoE基因与SLCO1B1基因位点的核酸检测引物， 其特征 在于， 所述ApoE基因c.388T>C位点的反向共用型引物包含序列为SEQ  ID NO.3的反向共用 引物， 所述ApoE基因c.526C>T位点的正向共用型引物包含序列为SEQ  ID NO.7的正向共用 引物， 所述SLCO1B1基因c.388A>G位点的反向共用型引物包含序列为SEQ  ID NO.11的反 向 共用引物， 所述SLCO1B1基因c.521T>C位点的反向共用型引物包含序列为SEQ  ID NO.15的权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114717306 A 2反向共用引物。 9.一种用于检测人类ApoE基因位点的试剂盒， 其特征在于， 包含权利要求1 ‑4任一所述 的用于人类ApoE基因位点的核酸检引物， 还包含ApoE基因c.388T>C位点的第一荧光探针序 列， ApoE基因c.526 C>T位点的第二 荧光探针序列， 内标引物对， 内标探针， 反应液。 10.如权利要求9所述的用于检测人类ApoE基因位点的试剂盒， 其特征在于， 所述第一 探针序列包含序列为SEQ  ID NO.4的探针序列， 所述第二荧光探针序列包含序列为SEQ  ID  NO.8的探针序列， 所述内标引物对为RPPH的引物对， RPPH的引物对包含序列为SEQ  ID  NO.17的正向引物和序列为SEQ  ID NO.18的反向引物， 所述内标探针为RPPH探针， 包含序列 为SEQ ID NO.19的探针序列。 11.如权利要求9或10所述的用于检测人类ApoE基因位点的试剂盒， 其特征在于， 还包 含样本处 理液。 12.一种用于检测人类ApoE基因与SLCO1B1基因位点的试剂盒， 其特征在于， 包含权利 要求5‑8任一所述的用于人类ApoE基因与SLCO1B1基因位点的核酸检测引物， 还包含ApoE基 因c.388T>C位点的第一荧光探针序列， ApoE基因c.526C>T位点的第二荧光探针序列， SLCO1B1基因c.388A>G位点的第三荧光探针序列， SLCO1B1基因c.521T>C位点的第四荧光探 针序列， 内标引物对， 内标探针， 反应液。 13.如权利 要求12所述的用于检测人类ApoE基因与SLCO1B1基因位点的试剂盒， 其特征 在于， 所述第一荧光探针序列包含序列为SEQ  ID NO.4的探针序列， 所述第二荧光探针序列 包含序列为SEQ  ID NO.8的探针序列， 所述第三荧光探针序列包含序列为SEQ  ID NO.12的 探针序列， 所述第四荧光探针序列包含序列为SEQ  ID NO.16的探针序列， 所述内标引物对 为RPPH的引物对， RPPH的引物对包含序列为SEQ  ID NO.17的正向引物和序列为SEQ  ID  NO.18的反向引物， 所述内标探针为RP PH探针， 包含序列为SEQ  ID NO.19的探针序列。 14.如权利 要求12或13所述的用于检测人类ApoE基因与SLCO1B1基因位点的试剂盒， 其 特征在于， 还 包含样本处 理液。 15.一种用于识别ApoE基因或/和 SLCO1B1基因位点的方法， 其特征在于， 利用上述权利 要求9‑11任一所述的用于检测人类ApoE基因位点的试剂盒， 或/和上述权利要求12 ‑14任一 所述的用于检测人类ApoE基因与SLCO1B1基因位点的试剂盒， 从待测样 本中提取基因组DNA 作为扩增模板， 以所述扩增模板进行多重PCR扩增反应， 得到P CR产物， 根据所述PCR产物， 确 定所述待测样本的APOE基因和/或SLCO1B1基因的基因型。 16.如权利要求15所述的方法， 其特征在于， 在试剂盒中加入待测样本， 采用涡旋混匀 和/或瞬时离心的方式形成待检测混合液， 以所述待检测混合液进行多重PCR扩增反应， 得 到PCR产物； 根据所述PCR产物， 确定所述待测样本的APOE基因和/或SLCO1B1基因的基因型。权