(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210394768.6 (22)申请日 2022.04.15 (71)申请人 常州市妇幼保健院 地址 213016 江苏省常州市丁 香路16号 申请人 苏州行知康众生物科技有限公司 (72)发明人 虞斌　朱琦　王晶　张玢　周燕　 王馨月　 (74)专利代理 机构 苏州谨和知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 32295 专利代理师 叶栋 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 22q11微缺失和/或微重复检测引物组、 引物 探针组合物、 试剂盒及其应用 (57)摘要 本申请涉及一种22q11微缺失和/或微重复 检测引物组、 引物探针组合物、 试剂盒及其应用， 其包括具有如SEQ  ID NO.1至SEQ  ID NO.24所示 序列的12对引物P1 ‑P12。 本申请针对染色体 22q11微缺失和/或微重复， 对序列进行分析， 平 衡各序列之间的稳定性、 反应条件、 扩增效率、 灵 敏性等因素， 对染色体22q11进行区域划分， 设计 了12对引物和探针。 在保证引物的扩增效率的同 时， 避免引物之间的交叉影响， 同时具有极高的 精确度。 权利要求书1页 说明书15页 序列表4页 附图1页 CN 114592056 A 2022.06.07 CN 114592056 A 1.一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物组， 其特征在于， 所述引物组包括12对引 物： P1， 包括如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示的上游引物和下游引物； P2， 包括如SEQ  ID NO.3和SEQ  ID NO.4所示的上游引物和下游引物； P3， 包括如SEQ  ID NO.5和SEQ  ID NO.6所示的上游引物和下游引物； P4， 包括如SEQ  ID NO.7和SEQ  ID NO.8所示的上游引物和下游引物； P5， 包括如SEQ  ID NO.9和SEQ  ID NO.10所示的上游引物和下游引物； P6， 包括如SEQ  ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的上游引物和下游引物； P7， 包括如SEQ  ID NO.13和SEQ  ID NO.14所示的上游引物和下游引物； P8， 包括如SEQ  ID NO.15和SEQ  ID NO.16所示的上游引物和下游引物； P9， 包括如SEQ  ID NO.17和SEQ  ID NO.18所示的上游引物和下游引物； P10， 包括如SEQ  ID NO.19和SEQ  ID NO.20所示的上游引物和下游引物； P11， 包括如SEQ  ID NO.21和SEQ  ID NO.22所示的上游引物和下游引物； P12， 包括如SEQ  ID NO.23和SEQ  ID NO.24所示的上游引物和下游引物。 2.一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物探针组合物， 其特征在于， 包括如权利要 求1所述的引物组， 以及探针。 3.如权利要求2所述的引物探针组合物， 其特征在于， 所述探针为Taqman探针， 所述 Taqman探针的5 ’末端标记有荧 光基因， 3 ’末端标记有 萃灭基团。 4.如权利要求2所述的引物探针组合物， 其特征在于， 所述引物探针组合物检测染色体 22q11的微缺失和/或微重复， 检测区域 为所述染色体2 2q11的18.5‑25区域。 5.如权利要求4所述的引物探针组合物， 其特征在于， 所述检测区域包括第一区域、 第 二区域和第三区域， 所述第一区域为LCR22 ‑2至LCR22 ‑3a的区域， 所述第二区域为LCR22 ‑3a 至LCR22‑4的区域， 所述第三区域 为LCR22‑4至LCR22‑8的区域。 6.如权利要求5所述的引物探针组合物， 其特征在于， 所述P1至P3的靶基因位于所述第 一区域， 所述P4至P6的靶基因位于所述第二区域， 所述P7至P12的靶基因位于所述第三区 域； 所述第三 区域包括由LCR22 ‑4至LCR22 ‑5的第一检测段、 LCR22 ‑5至LCR22 ‑6的第二检测 段， 以及LCR2 2‑6至LCR22‑7的第三检测段。 7.如权利要求6所述的引物探针组合物， 其特征在于， 检测所述第 一区域和第 二区域的 探针组分别标记不同的荧光基因， 检测所述第三区域中不同检测段的探针组分别标记不同 的荧光基因。 8.一种检测22q11微缺失和/或微重复的试剂盒， 其特征在于， 包括如权利要求2至7中 任一项所述的引物探针组合物。 9.如权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括酶混合液、 dNTP混合液 或PCR缓冲液中的任意 一种或至少两种的组合， 以及， 内参基因引物探针。 10.权利要求1所述的引物组、 权利要求2至7中任一项所述的引物探针组合物或权利要 求8或9所述的试剂盒在制备2 2q11微缺失和/或微重复诊断产品中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114592056 A 222q11微缺失和/或微 重复检测引物组、 引物探针组合物、 试剂 盒及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物组、 引物探针组合物、 试剂 盒及其应用， 属于核酸检测技 术领域。 背景技术 [0002]22q11微缺失/微重复综合征是指22号 染色体22q11.21～q11.23微小缺失/重复所 造成的临床症候群。 一般的发病 概率为1/4000， 男女发病无差异。 这一段缺失/重复因涉及 多个遗传性基因， 不同的基因异常导致的临床综合征略有差异。 主要有： DiGeor ge综合征； 腭心面综合征(velocardiofacial  syndrome， VC FS)； 先天性异常面容综合征等。 微缺失/微 重复的范围大约在1.5Mb至3Mb不一(覆盖基因20 ‑30个)， 一般来说该缺失/重复大部分为新 发变异(占94％)， 也有部分为遗传性(占6％)。 [0003]该微缺失/微重复综合征最主要临床表现有： 心脏缺陷、 胸 腺发育不全、 咽腭闭锁 不全伴腭裂、 甲状旁腺发育不全版低 钙血症、 异常面容等。 但在生长发育和智力发育方面来 说还算是正常 的， 通常有发育迟缓， 身高、 体重增 长较正常人慢， 智商位于正常范围， 1/3有 说话延迟， 少部分有严重智力缺陷， 在抽象理解能力方面有困难， 解决问题的能力差， 学习 方面有困难。 总体来说， 大部分患者发育倾向于正常水平， 学习有轻微障碍 。 [0004]检测22q11微缺失/微重复的方法目前有多种， 主要有染色体核型分析、 限制 性片 段长度多态 性检测、 Southern杂交以及FISH、 基因芯片技术等方法， 其中以FISH方法最为灵 敏、 可靠， 已被运用于临床诊断， 但由于成本高、 耗时长、 技术难度高等原因， 还不能成为大 范围高危人群的筛查手段。 染色体核型分析包括普通带型分析和高分辨技术， 它不仅可以 检测22q11微缺失/微重复， 还可以同时观察其他的染色体异常， 且技术成熟， 操作简单， 但 检出率仅为10％～20％。 基因芯片技术用gDNA克隆或cDNAs微阵列代替中期染色体铺片作 为杂交靶， 用微阵列每个靶点上的两种信号的荧光比例反映待测基因组DNA在相应的序列 或基因上的拷贝数变化。 此技术可以自动化操作， 具有灵敏度和准确是高， 实现了自动化和 程序化等优点， 但也存在价格高、 需一定量的特殊设备及需要一定技术的专业人员进行操 作等限制， 不能被广泛的应用。 由于以上技术 都各自存在局限性， 使其无法成为临床常用的 或可信的诊断手段。 微卫星DNA广泛分布于基因组中， 具有高度多态性、 遗传稳定性高等优 点， 在22q11区域内选取这些微卫星DNA标记， 进行P CR扩增， 可以快速、 低成本的检出微小缺 失/重复， 并大致界定缺失范围。 但缺点是必须有双亲的DNA样 本， 多态信息量不高时难以下 诊断性结论； 并且在 进行PCR扩增时， 存在等位基因丢失现象， 需要反复验证结果， 因此经典 的PCR‑STR方法是一种快速筛查方法， 但对筛查出的阳性病例还需用FISH、 基因芯片技术等 其它检测方法进一 步确诊。 发明内容 [0005]本发明的目的在 于提供一种22q11微缺失和/或微重复检测引物组、 引物探针组合说　明　书 1/15 页 3 CN 114592056 A 3