(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210698985.4 (22)申请日 2022.06.20 (71)申请人 深圳先进技 术研究院 地址 518055 广东省深圳市南 山区西丽大 学城学苑大道1068号 (72)发明人 万晓春　陈有海　刘茂玄　戴昆　 刘骏晨　 (74)专利代理 机构 北京市诚辉律师事务所 11430 专利代理师 范盈　姚幸茹 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/861(2006.01) C12N 5/10(2006.01)A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种嵌合抗原受体、 表达嵌合抗原受体的巨 噬细胞及应用 (57)摘要 本发明公开了一种嵌合抗原受体、 表达嵌合 抗原受体的巨噬细胞及应用， 该嵌合抗原受体一 级蛋白结构从氨基端到羧基端顺次为： 信号肽、 NKG2D胞外区、 铰链区、 跨膜区和胞内信号区； 所 述NKG2D胞外区为人NKG2D的胞外域， 其氨 基酸序 列如SEQ ID NO.2所示。 本发明嵌合抗原受体巨 噬细胞包含所述嵌合抗原受体的编码基因或所 述嵌合抗原受体的编码基因的表达载体。 本发明 嵌合抗原受体巨噬细胞除了可以直接杀伤肿瘤 细胞之外， 其优势在于： 可 以改善实体瘤肿瘤免 疫微环境； 在吞噬肿瘤细胞后可以作为抗原呈递 细胞呈递抗原； 更容易浸润到肿瘤内部， 协 同其 他免疫细胞浸润肿瘤等。 权利要求书1页 说明书6页 序列表4页 附图1页 CN 114989310 A 2022.09.02 CN 114989310 A 1.一种嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体一级蛋白结构从氨基端到羧基 端顺次为： 信号肽、 NKG2D胞外区、 铰链区、 跨膜区和胞内信号区； 所述NKG2D胞外区为人NKG2D的胞外域， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述信号肽选自CD8α信号肽、 CD28信号肽、 CD4信号肽或GM ‑CSF信号肽； 所述铰链区选自CD 8α 铰链区或CD28铰链区； 所述跨膜区选自CD 8α 跨膜区或CD28跨膜区； 所述胞内信号区选自CD3ζ 或FcRγ。 3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述信号肽源于人CD8α， 其氨基 酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述铰链区源于人CD 8α， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述跨膜区源于人CD 8α， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.4所示； 所述胞内信号区为CD3ζ， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.5所示。 4.权利要求1 ‑3任一项所述嵌合 抗原受体的编码基因。 5.含有权利要求 4所述嵌合 抗原受体的编码基因的表达载体。 6.根据权利要求5所述的表达载体， 其特征在于， 所述表达载体选自慢病毒表达载体、 逆转病毒表达载体或腺病毒表达载体。 7.一种表达嵌合抗原受体的巨噬细胞， 其特征在于， 包含权利要求4所述嵌合抗原受体 的编码基因或权利要求5所述嵌合 抗原受体的编码基因的表达载体。 8.根据权利要求7所述的表达嵌合抗原受体的巨噬细胞， 其特征在于， 所述巨噬细胞源 自健康人体或癌症患者； 所述巨噬细胞选自 自体巨噬细胞、 异体巨噬细胞或iP SC诱导的巨噬细胞； 优选地， 所述巨噬细胞为原 代巨噬细胞。 9.权利要求7 所述的表达嵌合 抗原受体的巨噬细胞在制备肿瘤治疗药物中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特 征在于， 所述肿瘤为 NKG2D配体表达的肿瘤； 所述肿瘤为血 液瘤或实体瘤； 优选地， 所述肿瘤为白血病、 多发性骨髓瘤、 恶性淋巴瘤、 脑胶质瘤、 肝癌、 肺癌、 胃癌、 结肠癌、 胰腺癌或乳腺癌。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114989310 A 2一种嵌合 抗原受体、 表达嵌合 抗原受体的巨噬细胞及应用 技术领域 [0001]本发明涉及肿瘤治疗领域， 具体涉及细胞免疫治疗肿瘤， 尤其涉及NKG2DCAR ‑M细 胞免疫疗法， 更 具体地涉及一种嵌合 抗原受体、 表达嵌合 抗原受体的巨噬细胞及应用。 背景技术 [0002]2018年全球肿瘤统计结果显示， 仅仅一年， 全球新增患者1,810万， 死亡患者高达 960万， 其中单单我国就有新增病例380.4万， 死亡病例29.6万。 如此严峻的形势严重威胁着 我国国民健康， 并为社会经济造成巨大的负担。 尽管随着医药科技的飞速发展， 越来越多的 方法手段被用于肿瘤的治疗， 但是远远还不够。 因此， 在未来很长的一段时间内开 发研究肿 瘤治疗的新方法依旧是重中之重 。 [0003]一直以来， 恶性肿瘤的治疗疗效不足、 治愈率低， 使之成为严重威胁着人类健康的 重大疾病。 传统的放化疗法旨在直接消灭肿瘤， 但肿瘤常复发转移， 又会杀伤正常组织细 胞。 肿瘤的细胞免疫治疗的目的则是促进或修饰免疫细胞攻击癌细胞， 同时保持正常细胞 的完整性。 与传统的放化疗相比， 细胞的过继治疗具有良好的特异性、 安全性、 有效性和持 久性， 在2013年十大 科技进步中排名第一。 [0004]近年来， 以DCs、 T细胞、 NK细胞等为基础的过继性细胞治疗在肿瘤治疗中取得了较 好的效果。 尤其是以嵌合抗原受体T细胞(Chimeric  Antigen Receptor  T‑Cell,CAR ‑T)为 代表的免疫细胞治疗技术在血液肿瘤的治疗上展现出了强大的疗效和巨大的发展潜力， 已 然成为人类对抗癌症的新希望。 嵌合抗原受体(CAR)T细胞免疫疗法是一种肿瘤过继细胞免 疫疗法， 基本原理是利用基因工程修饰T淋巴细胞， 使其表达嵌合抗原受体， 以非主要组织 相容性复合体(MHC， major  histocompatibility  complex)限制性的方式杀伤肿瘤细胞。 虽 然CART细胞在临床及临床试验中取得了较好的效果， 但同时也出现了较为严重的副作用， 包括细胞因子释放综合征、 神经毒性和脱靶效应等。 而且， CAR ‑T细胞疗法对血液系统恶性 肿瘤的治疗效果十分强大， 尤其是在对抗急性淋巴母细胞性白血病(Acute  Lymphoblastic   Leukemia， ALL)方面， 但用CAR ‑T细胞治疗实体瘤的效果并不理想。 在实体瘤的治疗中， CAR ‑ T细胞治疗 未取得较大突破有以下几个原因： 首先， CAR ‑T细胞必须运输并渗透到肿瘤中， 这 是一个需要外渗， 趋化性和基质组织渗透的过程。 CAR ‑T细胞必须穿过粘附分子减少的异常 肿瘤血管， 经历趋化因子/趋化因子受体失配， 并且必须通过密集的细胞和基质屏障迁移。 进入肿瘤微环境(Tumor  Microenvironment,TME)后， 效应细胞会遇到不利条件， 例如低 氧 和酸性环境、 免疫检查点配体的表达以及大量免疫抑制细胞， 如肿瘤相关巨噬细胞(Tumor   Associated  Macrophage,TAM)、 髓源性抑制细胞(Myeloid  Derived Suppressor  Cell, MDSC)和调节性T细胞(Regulatory  Cells,T‑regs)。 此外， 长期的抗原接触会导致T细胞衰 竭， 从而降低CAR  T细胞的效应子功能。 即使CAR ‑T细胞在TME中存活， 实体瘤也经常具有异 质的表面抗原表达， 这可能导致逃避CAR  T细胞检测， 肿瘤清除不完全以及抗原阴性肿瘤细 胞的最终生长。 这在使用靶向EGFRvIII的CAR  T细胞治疗胶质母细胞瘤中得到了明确的证 明， 在治疗后5/7的患者中EGFRvIII的表达下降了。 最后， CAR ‑T细胞可能会识别正常组织和说　明　书 1/6 页 3 CN 114989310 A 3