(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210704143.5 (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 泰州市人民医院 地址 225300 江苏省泰州市海陵区海陵南 路399号 (72)发明人 华璐　颜大亮　万春华　王鹏　 (74)专利代理 机构 南京瑞弘专利商标事务所 (普通合伙) 32249 专利代理师 秦秋星 (51)Int.Cl. C07K 14/47(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 15/85(2006.01) A61K 38/17(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 靶向DHX38多肽构建及其抗肝细胞癌干细胞 活性应用 (57)摘要 本发明公开了靶向DHX38多肽的构建及其抗 肝细胞癌的活性； 其中， 一种靶向DHX38 多肽的构 建的序列， 其包括， 靶向DHX38多肽， 其核苷酸序 列如SEQ ID NO:1； 一种靶向DHX38多肽的构建方 法， 其包括， 合成 并将靶向DHX38多肽的核 酸序列 与pcDNA3.1(+)真核表 达载体在T4连接酶作用下 连接， 获得重组质粒； 将所述重组质粒利用脂质 体转染肝细胞癌细胞。 本发明利用多种功能手段 分析其对肝细胞癌恶性及干细胞性的拮抗作用。 在细胞生物学层面证明了此靶向DH X38多肽具有 抑制肝细胞癌干细胞性并增强顺铂介导的化疗 杀伤活性的潜能。 权利要求书2页 说明书5页 附图3页 CN 115417920 A 2022.12.02 CN 115417920 A 1.一种靶向DHX38多肽， 其特 征在于， 其cDNA序列和表达的多肽氨基酸序列： 1  SMYQLWILGA LDNTGGLTST 21  GRLMVEFPLD  PALSKMLIVS 41  CDMGCS SEIL LIVSMLSVPA 61  IFYRPKGRE E ESDQIREKFA 81  VPESDHLTYL NVYLQWKNNN 101 YSTIWCNDHF IHAKAMRKVR 121 EVRAQLKDIM VQQRMSLASC 141 GTDWDIVRKC  ICAAYFHQAA 161 KLKGIGEYVN IRTGMPCHLH 181 PTSSLFGMGY TPDYIVYHEL 201 VMTTKEYMQC VTAVDGEWLA 221 ELGPMFYSVK  QAGKSRQENR 241 RRAKEEASAM EEEMALAEEQ 261 LRARRQEQEK RSPLGSVRST 281 KIYTPGRKEQ  GEPMTPRRTP 301 ARFGL。 2.根据权利要求1所述的一种靶向DHX38多肽， 其特 征在于， 其编码cDNA序列： 1  TCCATGTACC AACTTTGGAT CTTGGGGGCC TTGGATAACA CTGGGGGTCT TACATCTACA 61  GGGAGACTGA  TGGTGGAATT TCCCTTGGAT CCCGCACTGA GCAAGATGTT GATCGTCTCT 121 TGTGACATG G GATGTTCATC CGAGATTCTT CTCATCGTA A GTATGCTCTC  AGTTCCAGCC 181 ATCTTCTATC GACCGAAAGG GAGAGAGGAG GAGTCAGAC C AGATTAGAGAGA AATTTGCT 241 GTCCCAGAAT CAGACCACCT TACCTACCTT AATGTATATC  TGCAGTGGAA GAATAATAAT 301 TACTCCACTA TCTGGTGTAA CGATCACT TT ATACACGC CA AGGCAATGAG GAAGGTCCGC 361 GAGGTTCGAG CTCAACTCAA GGACATTATG GTTCAACAGC GCATGTCCCT TGCATCCTGT 421 GGCACGGATT GGGACATAGT  AAGGAAGTGC ATTTGCGCTG CGTATTTCCA CCAGGCAGCC 481 AAACTTAAGG GGATTGGAGA ATACGTAAAC ATTCGCACCG GGATGCCTTG TCATCTCCAT 541 CCAACGTCTT CTCTCTTCGG AATGGGTTAC ACGCCAGATT ACATTGTGTA TCACGAATTG 601 GTAATGACTA CGAAAGAATA CATGCAGTGC  GTTACTGCGG TAGATGGGGAGTGGCTGGCC 661 GAGTTGGGAC CAATGTTTTA TAGTGTGA AA CAAGCAGGTA AAAGCAGACAG GAAAATCGC 721 AGACGGGCCA AGGAGGAGGC GAGCGCTATG  GAAGAGGAGA TGGCACTGGCCGAAGAGCAA 781 CTTAGGGCAC GGCGACAAGA ACAGGAAAAG CGGTCACCAC TCGGCTCTGTTAGATCCACC 841 AAAATATACA CTCCGGGGCG GAAAGAGCAA GGCGAGCCCA TGACGCCACGACGCACTC CT 901 GCTCGCTTCG GTCTG。 3.一种如权利要求1所述靶向DHX38多肽的构建及表达方法， 其特征在于， 包括人工合 成上述多肽的基因编码， 并经第一限制性内切酶处理后， 与第二限制性内切酶酶切线性化 的表达载体混合， 加入连接酶 缓冲液和连接酶， 室温放置后连接获得重组载体。 4.根据权利要求3所述的构建及表达方法， 其特征在于， 所述第一限制性内切酶包括 HindIII和XhoI。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115417920 A 25.根据权利要求3所述的构建及表达方法， 其特征在于， 所述第二限制性内切酶包括 BamHI和Hi ndIII。 6.根据权利要求3所述的构建及表达方法， 其特征在于， 经第 一限制性内切酶处理后的 基因编码， 以3:1的摩尔浓度与第二限制性内切酶 酶切线性 化的表达载体混合。 7.根据权利要求3所述的构建及表达方法， 其特 征在于， 所述表达载体为pcDNA3.1(+)。 8.根据权利要求3所述的构建及表达方法， 其特征在于， 所述连接酶缓冲液和连接酶分 别为10％体积的T4  DNA连接酶 缓冲液和1 μl  T4 DNA连接酶。 9.一种如权利要求1所述靶向DHX38多肽 在肝细胞肝癌的靶向治疗中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115417920 A 3