(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210703429.1 (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 深圳先进技 术研究院 地址 518055 广东省深圳市南 山区西丽大 学城学苑大道1068号 (72)发明人 万晓春　陈有海　刘茂玄　戴昆　 刘骏晨　 (74)专利代理 机构 北京市诚辉律师事务所 11430 专利代理师 范盈　姚幸茹 (51)Int.Cl. A61K 39/00(2006.01) A61K 35/15(2015.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01)C12N 5/10(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/861(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C07K 19/00(2006.01) (54)发明名称 CAR-T和CAR-M联用在制备抗肿瘤药物中的 应用 (57)摘要 本发明公开了CAR ‑T和CAR‑M联用在制备抗 肿瘤药物中的应用， CAR ‑T为经嵌合抗原受体修 饰的T细胞， 嵌合抗原受体一级蛋白结构从氨基 端到羧基端顺次为： 信号肽、 NKG2D胞外区、 铰链 区、 跨膜区、 胞内共刺激信号区和胞内信号区； CAR‑M为经嵌合抗原受体修饰的巨噬细胞， 嵌合 抗原受体一级蛋白结构从氨基端到羧基端顺次 为： 信号肽、 NKG2D胞外区、 铰链区、 跨膜区和胞内 信号区； NKG2D胞外区为人NKG2D胞外域， 氨基酸 序列如SEQ  ID NO.2所示。 CAR ‑T和CAR‑M联用将 CAR‑M改善肿瘤微环境的能力与CAR ‑T直接杀伤 肿瘤细胞的能力相结合， 可以实现对肿瘤细胞的 强力高效杀伤， 极大提高疗效。 权利要求书2页 说明书9页 序列表4页 附图3页 CN 115212299 A 2022.10.21 CN 115212299 A 1.CAR‑T和巨噬细胞联用在制备抗肿瘤药物中的应用， 其特征在于， 所述CAR ‑T为经嵌 合抗原受体修饰的T细胞， 所述嵌合抗原受体一级蛋白结构从氨基端到羧基端顺次为： 信号 肽、 NKG2D胞外区、 铰链区、 跨膜区、 胞内共刺激信号区和胞内信号区； 所述NKG2D胞外区为人NKG2D的胞外域， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 2.CAR‑M和T细胞联用在制备抗肿瘤药物中的应用， 其特征在于， 所述CA R‑M为经嵌合抗 原受体修饰的巨噬细胞， 所述嵌合抗原受体一级蛋白结构从氨基端到羧基端顺次为： 信号 肽、 NKG2D胞外区、 铰链区、 跨膜区和胞内信号区； 所述NKG2D胞外区为人NKG2D的胞外域， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 3.CAR‑T和CAR‑M联用在制备抗肿瘤 药物中的应用， 其特征在于， 所述CAR ‑T为经嵌合抗 原受体修饰的T细胞， 所述嵌合抗原受体一级蛋白结构从氨基端到羧基端顺次为： 信号肽、 NKG2D胞外区、 铰链区、 跨膜区、 胞内共刺激信号区和胞内信号区； 所述CAR‑M为经嵌合抗原受体修饰的巨噬细胞， 所述嵌合抗原受体一级蛋白结构从氨 基端到羧基端顺次为： 信号肽、 NKG2D胞外区、 铰链区、 跨膜区和胞内信号区； 所述CAR‑T和CAR‑M中嵌合抗原受体NKG2D胞外区为人NKG2D的胞外域， 其氨基酸序列如 SEQ ID NO.2所示。 4.根据权利要求1 ‑3任一项所述的应用， 其特征在于， 所述信号肽选自CD8α信号肽、 CD28信号肽、 CD4信号肽或GM ‑CSF信号肽； 所述铰链区选自CD 8α 铰链区或CD28铰链区； 所述跨膜区选自CD 8α 跨膜区或CD28跨膜区； 所述胞内信号区选自CD3ζ 或FcRγ。 5.根据权利要求1 ‑3任一项所述的应用， 其特征在于， 所述信号肽源于人CD8α， 其氨基 酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述铰链区源于人CD 8α， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述跨膜区源于人CD 8α， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.4所示； 所述胞内信号区为CD3ζ， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.5所示。 6.根据权利要求1或3所述的应用， 其特征在于， 所述胞内共刺激信号区选自4 ‑1BB、 CD28、 CD27、 OX40或ICOS； 优选地， 所述胞内共刺激信号区选自4 ‑1BB， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.11所示。 7.根据权利 要求1或3所述的应用， 其特征在于， 所述CAR ‑T构建方法为： 将CAR ‑T嵌合抗 原受体编码基因的核酸或载体导入T细胞中； 所述导入的方式包括电穿 孔、 转导或转染； 优选地， 所述核酸位于不同的病 毒载体上； 所述病 毒载体为慢病 毒载体、 腺病毒载体或 逆转录病毒载体； 优选地， 所述载体为 转座子或mRNA载体； 优选地， 将包 含CAR‑T嵌合抗原受体编码基因的慢病毒载体通过转染导入T细胞中。 8.根据权利 要求2或3所述的应用， 其特征在于， 所述CAR ‑M构建方法为： 将CAR ‑M嵌合抗 原受体编码基因的核酸或载体导入巨噬细胞细胞中； 所述导入的方式包括电穿 孔、 转导或转染； 优选地， 所述核酸位于不同的病 毒载体上； 所述病 毒载体为慢病 毒载体、 腺病毒载体或权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115212299 A 2逆转录病毒载体； 优选地， 所述载体为 转座子或mRNA载体； 优选地， 将包含CAR ‑M嵌合抗原受体编码基因的腺病毒载体通过转染导入巨噬细胞细 胞中。 9.根据权利要求1 ‑3任一项所述的应用， 其特征在于， 所述巨噬细胞源自健康人体或癌 症患者； 所述巨噬细胞选自 自体巨噬细胞、 异体巨噬细胞或iP SC诱导的巨噬细胞； 优选地， 所述巨噬细胞为原 代巨噬细胞； 所述T细胞源自健康人体或癌症患者； 所述T细胞选自 自体T细胞、 异体T细胞或iP SC诱导的T细胞。 10.根据权利 要求1‑3任一项所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤为NKG2D配体表达的肿 瘤； 所述肿瘤为血 液瘤或实体瘤； 优选地， 所述肿瘤为白血病、 多发性骨髓瘤、 恶性淋巴瘤、 脑胶质瘤、 肝癌、 肺癌、 胃癌、 结肠癌、 胰腺癌或乳腺癌。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115212299 A 3