(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210726461.1 (22)申请日 2022.06.23 (71)申请人 湛江中心人民医院 地址 524033 广东省湛江市赤坎区源珠路 236号 (72)发明人 齐妍　姚晴　 (74)专利代理 机构 长沙伊柏专利代理事务所 (普通合伙) 4326 5 专利代理师 丁敏 (51)Int.Cl. A61K 31/704(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 9/51(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种基于载药囊泡的突破血脑屏 障组合物 及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种基于载药囊泡的突破血 脑屏障组合物及其应用， 包括载药囊泡纳米粒和 减毒沙门氏菌， 载药囊泡纳米粒是由细菌外膜囊 泡和多柔比星通过自组装形成的球形纳米粒。 本 发明的基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物联 合使用， 先通过减毒沙门氏菌定植在颅内肿瘤位 置； 然后载药囊泡纳米粒进入体内， 在TLR4的介 导下内化到中性粒细胞中； 携带有载药囊泡纳米 粒的中性粒细胞在定植于颅内肿瘤部位的沙门 氏菌招募作用下， 被选择性识别从而通过血脑屏 障， 靶向到定植于颅内肿瘤周围的沙门氏菌， 载 药囊泡纳米粒 以“顺风车”的形式靶向到达颅内 肿瘤周围； 载药囊泡纳米粒在肿瘤微酸性环境释 放出多柔比星， 对肿瘤进行杀伤， 同时清除定植 的沙门氏菌防止感 染。 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 CN 115252632 A 2022.11.01 CN 115252632 A 1.一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物， 其特征在于， 包括载药囊泡纳米粒和减 毒沙门氏菌， 所述载药囊泡纳米粒是由细菌外膜囊泡和多柔比星通过自组装形成的球形纳 米粒。 2.根据权利要求1所述的一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物， 其特征在于， 所述 组合物的使用方法为： 先注射所述减毒沙门氏菌， 24～48h后再注射所述载 药囊泡纳米粒。 3.根据权利要求1所述的一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物， 其特征在于， 所述 细菌纳米囊泡 为革兰氏阴性菌自然释放的纳米级蛋白脂质体。 4.根据权利要求3所述的一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物， 其特征在于， 所述 革兰氏阴性菌为沙门氏菌 。 5.根据权利要求1所述的一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物， 其特征在于， 所述 细菌外膜囊泡和多柔比星的质量比为1:1。 6.根据权利要求1～5任一项所述的一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物， 其特征 在于， 所述载 药囊泡纳米粒的制备包括以下步骤： S1、 革兰阴氏菌 接种培养， 超速离心收集 革兰阴氏菌分泌的细菌 外膜囊泡； S2、 将步骤S1中获得的细菌 外膜囊泡与多柔比星在PBS缓冲液中室温下混合孵 育； S3、 将步骤S2中的混合孵育液使用超滤管去除空载的多柔比星， 然后将得到的纳米粒 用PBS缓冲液洗涤， 即得 载药囊泡纳米粒。 7.根据权利要求6所述的一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物， 其特征在于， 所述 步骤S2中混合孵 育时间为 4～6h。 8.根据权利要求6所述的一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物， 其特征在于， 所述 步骤S3中超滤 管为100kDa。 9.一种如权利要求1～8任一项所述的一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物在制 备抗肿瘤药物中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特 征在于， 所述肿瘤为脑胶质瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115252632 A 2一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及纳 米材料和纳米生物医药领域， 具体涉及一种基于载药囊泡的突破血 脑屏障组合物及其应用。 背景技术 [0002]血脑屏障(BBB)是指脑毛细血管壁与神经胶质细胞形成的血浆与脑细胞之间的屏 障和由脉络丛形成的血浆和脑脊液之间的屏障， 这些屏障能够阻止某些物质(多半是有害 的)由血液进入脑组织。 血液中多种溶质从脑毛细血管进入脑组织， 有难有易； 有些很快通 过， 有些较慢， 有 些则完全不能通过， 这种有选择性的通透现象使 人们设想可能有限制溶质 透过的某种 结构存在， 这种 结构可使脑组织少受甚至不受循环血液中有害物质的损害， 从 而保持脑组织内环境的基本稳定， 对维持 中枢神经系统正常生理状态具有重要的生物学意 义。 [0003]脑胶质瘤是由于大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的、 最常见的原发性颅脑肿瘤。 年发病率约为3‑8人/10万人口。 如同其他肿 瘤(疾病)一样， 胶质瘤也是由于先天的遗传高 危因素和环境的致癌因素相互作用所导致的。 一些已知的遗传疾病， 例如神经纤维瘤病(I 型)以及结核性硬化疾病等， 为脑胶质瘤的遗传易感因素。 目前， 化疗是脑胶质瘤的重要辅 助治疗手段， 但疗效不佳， 这主要与药物通过脑组织所特有的血脑屏障(BBB)受限有关， 大 分子化疗药物很难通过BBB 进入颅脑内肿瘤部位。 为了解决这些限制， 亟需开 发出可以有效 通过血脑屏障进入颅脑中肿瘤部位， 对肿瘤进行有效杀伤的生物材 料。 发明内容 [0004]为解决上述技术问题， 本发明提出了一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物及 其应用， 其目的是为了构建一种可以有效通过血脑屏障(BBB)进入颅脑内， 并能主动高效靶 向颅脑内肿瘤 细胞的组合物， 该组合物具有较高生物安全性， 防止发生颅脑内感染。 [0005]为了实现上述目的， 本发明提供了一种基于载药囊泡的突破血脑屏障组合物， 包 括载药囊泡纳米粒和减毒沙门氏菌， 所述载药囊泡纳米粒是由细菌外膜囊泡和多柔比星通 过自组装形成的球形纳米粒。 [0006]作为优选， 所述组合物的使用方法为： 先注射所述减毒沙门氏菌， 24～48h后再注 射所述载 药囊泡纳米粒。 [0007]作为优选， 所述细菌纳米囊泡 为革兰氏阴性菌自然释放的纳米级蛋白脂质体。 [0008]作为优选， 所述 革兰氏阴性菌为沙门氏菌 。 [0009]作为优选， 所述细菌 外膜囊泡和多柔比星的质量比为1:1。 [0010]作为优选， 所述载 药囊泡纳米粒的制备包括以下步骤： [0011]S1、 革兰阴氏细菌 接种培养， 超速离心收集 革兰阴氏细菌分泌的细菌 外膜囊泡； [0012]S2、 将步骤S1中获得的细菌外膜囊泡与多柔比星在PBS缓冲液中室温下混合孵育 4h；说　明　书 1/7 页 3 CN 115252632 A 3