(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210733639.5 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 江苏省肿瘤医院 地址 210009 江苏省南京市玄武区百子亭 路42号 (72)发明人 唐莉　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 王艳 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01) C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12Q 1/02(2006.01) A61K 31/7088(2006.01) A61P 15/14(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 长链非编码RNA CYP1B1-AS1作为乳腺癌生 物标志物和治疗靶点的应用 (57)摘要 本发明公开了长链非编码RNA  CYP1B1‑AS1， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 本发明还公 开了CYP1B1 ‑AS1慢病毒过表达 载体、 慢病毒稳定 表达细胞株及其在制备乳 腺癌诊断试剂盒、 预防 或治疗乳腺癌药物或预后产品中的应用。 CYP1B1‑AS1在乳腺癌中显著下调表 达， 可作为乳 腺癌的诊断标志物。 CYP1B1 ‑AS1的表达水平与患 者的预后相关， 可作为乳腺癌的预后标志物。 上 调CYP1B1 ‑AS1可抑制乳腺癌 细胞的恶 性进展， 具 有作为基因治疗靶点的应用价值。 上调CYP1B1 ‑ AS1的表达 可提高乳腺癌细胞对化疗药物的敏 感 性。 本发明能够用于乳腺癌相关的诊断、 治疗、 提 高靶向药物敏感性等产品的制备中， 具有一定的 临床转化前景。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 附图4页 CN 114958856 A 2022.08.30 CN 114958856 A 1.长链非编码RNA  CYP1B1‑AS1， 其特 征在于， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.CYP1B1 ‑AS1慢病毒过表达载体， 其特征在于， 所述CYP1B1 ‑AS1慢病毒过表达载体含 有权利要求1所述的长链非编码RNA  CYP1B1‑AS1。 3.慢病毒稳定表达细胞株， 其特征在于， 所述慢病 毒稳定表达细胞株是将权利要求2所 述的CYP1B1‑AS1慢病毒过表达载体包 装成病毒颗粒感染宿主细胞获得。 4.权利要求1所述的长链非编码RNA  CYP1B1‑AS1在作为乳腺癌诊断标志 物中的应用。 5.权利要求1所述的长链非编码RNA  CYP1B1‑AS1、 权利要求2所述的CYP1B1 ‑AS1慢病毒 过表达载体、 权利要求3所述的慢病毒稳定表达细胞株在制备乳腺癌诊断试剂盒、 预防或治 疗乳腺癌药物或预后产品中的应用。 6.一种荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于， 所述荧光定量PCR检测试剂盒包括特异 性引物对， 其引物对序列如SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3。 7.根据权利要求6所述的荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于， 所述检测试剂盒还包 括逆转录试剂和实时荧 光定量PCR试剂。 8.根据权利要求6所述的荧光定量PCR检测试剂盒， 其特征在于， 所述检测试剂盒还包 括内参GAP DH引物对， 所述内参GAP DH引物对序列如SEQ  ID NO.4和SEQ  ID NO.5所示。 9.权利要求1所述的长链非编码RNA  CYP1B1‑AS1、 权利要求2所述的CYP1B1 ‑AS1慢病毒 过表达载体、 权利要求3所述的慢病毒稳定表达细胞株在制备提高乳腺癌细胞对化疗的敏 感性产品中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述应用通过加入不同浓度的顺铂处理 乳腺癌细胞， 然后通过加入C CK‑8测定CYP1B1‑AS1对癌细胞化疗药物敏感性的影响。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958856 A 2长链非编码RNA  CYP1B1‑AS1作为乳腺癌生物标志物和治疗靶 点的应用 技术领域 [0001]本发明属于肿瘤分子生物 学技术领域， 涉及 长链非编码RNA  CYP1B1‑AS1作为乳腺 癌诊断、 预后生物标志 物及治疗 靶点的应用。 背景技术 [0002]乳腺癌作为全球发病率第一的恶性肿瘤， 是女性癌症死亡的主要原因。 我国乳腺 癌的发病率不断升高， 由于缺乏及时有效的诊断及治疗， 常常导致患者最终治疗失败。 因 此， 深入探索乳腺癌的发展机制， 寻找新的诊疗靶标， 挖掘其应用价值， 开发其临床转化潜 能刻不容缓。 [0003]近年来的研究成果表明， 长度超过200nt的长链非编码RNA(long  noncoding  RNA， lncRNA)可以与DNA、 RNA或蛋白质相互作用， 参与染色体修饰、 转录、 核内运输、 翻译及翻译 后修饰等重要调控， 作用于多种细胞信号传导途径， 参与肿瘤 进展的全过程。 LncRNA表达失 调是人类癌症转录组的特 征性变化之一， 具 备成为肿瘤生物标志 物及治疗 靶分子的潜能。 [0004]本发明依托单位为江苏省肿瘤医院， 申请人承担了多项肿瘤相关的国家级和省级 自然科学基金项目， 累积了丰富的肿瘤相关分子标志物的研究经验。 近年来， 基因工程技术 在肿瘤研究中迅速发展， 基因诊断和分子靶向治疗在多种恶性肿瘤的临床中显示出巨大的 优势。 因此， 深入了解乳腺癌的发病机制， 明确相关分子标志物在疾病发展中的作用， 可为 乳腺癌个 体化精准诊疗奠定基础。 发明内容 [0005]发明目的： 本发明所要解决的技术问题是提供了有利于乳腺癌诊疗的长链非编码 RNA CYP1B1‑AS1， 揭示了l ncRNA CYP1B1‑AS1在解决乳腺癌临床现状中的应用潜能。 [0006]本发明还要解决的技术问题是提供了CYP1B1 ‑AS1慢病毒过表达载体、 慢病毒稳定 表达细胞株在制备乳腺癌诊断试剂盒、 预防或治疗乳腺癌药物或预后产品中的应用。 [0007]本发明还要解决的技 术问题是提供了一种荧 光定量PCR检测试剂盒。 [0008]技术方案： 为了解决上述技术问题， 本发明提供了长链非编码RNA  CYP1B1‑AS1， 其 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 [0009]CYP1B1‑AS1基因全称为： Cytochrome  P450 family 1 subfamily  B member 1‑ antisense  RNA 1， 位于2号染色体正 义链， 长度为17 76nt并带有po lyA尾。 [0010]Seq ID NO.1 [0011]＞NR_027252.1Homo  sapiens CYP1B1 antisense  RNA 1(CYP1B1 ‑AS1)， long  non‑coding RNA说　明　书 1/8 页 3 CN 114958856 A 3