(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210379218.7 (22)申请日 2022.04.12 (71)申请人 海南医学院 地址 570100 海南省海口市龙华区城西镇 学院路3号海南医学院 (72)发明人 于法标　赵琳璐　刘恒　王锐　 邢艳珑　窦昆　王蕊　程子译　 王娟　金剑峰　 (74)专利代理 机构 武汉泰山北斗专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 42250 专利代理师 董佳佳 (51)Int.Cl. G01N 21/65(2006.01) G01N 21/01(2006.01) (54)发明名称 一种SERS探针生物传感器及其制备方法和 使用方法 (57)摘要 本发明公开了一种SERS探针生物传感器及 其制备方法和使用方法， 涉及生物技术领域。 该 SERS探针生物传感器包 括DNA探针1、 DNA 探针2和 适配体， 所述DNA探针1和DNA探针2上至少有5个 碱基互补配对， DNA 探针1和DNA 探针2上的剩余碱 基与所述适配体上的碱基互补配对， 且DNA探针 1、 DNA探针2和适配体两两配对形成Y 形， 所述DNA 探针1还共价连接拉曼报告分子修饰的金纳米颗 粒， 所述DNA探针2共价连接表面修饰链霉亲和素 的磁珠。 本发明制备得到的SERS探针生物传感器 具有高灵敏度、 高特异性、 样本消耗量少、 精确度 高的高的优点， 能有效实现急性肾损伤的精准诊 断。 权利要求书2页 说明书8页 序列表4页 附图4页 CN 114739976 A 2022.07.12 CN 114739976 A 1.一种SERS探针生物传感器， 其特征在于： 包括DNA探针1、 DNA探针2和适配体， 所述DNA 探针1和DNA探针2上至少有5个碱基互补配对， DNA探针1和DNA探针2上的剩余碱基与所述适 配体上的碱基互补配对， 且DNA探针1、 DNA探针2和适配体两两配对形成Y型， 所述DNA探针1 还共价连接拉曼报告分子修饰的金纳米颗粒， 所述DNA探针2共价连接表面修饰链霉亲和素 的磁珠。 2.根据权利要求1所述的SERS探针生物传感器， 其特征在于： 所述拉曼报告分子为异硫 氰基‑孔雀石绿(MGITC)。 3.根据权利 要求1所述的SERS探针生物传感器， 其特征在于： 所述DNA探针1通过Au ‑S键 与所述拉曼报告分子修饰的金纳米颗粒共价连接， 所述DNA探针2通过SA ‑Biotin反应与所 述表面修饰链霉亲和素的磁珠共价连接 。 4.一种如权利 要求1‑3任一项所述的SERS探针生物传感器的制备方法， 其特征在于， 包 括以下步骤： S1金纳米颗粒的制备： 将柠檬酸钠溶液与氯金酸溶液加入到反应器内反应， 制得金纳 米颗粒； S2拉曼报告分子标记的金纳米的制备： 将拉曼报告分子添加到步骤S1制备的金纳米颗 粒中， 室温搅拌反应， 直至 拉曼报告分子通过Au ‑S键固定在金纳米颗粒表 面， 然后离心去除 未结合的拉曼报告分子； S3 DNA功能化的SERS探针的制备： 将DNA探针1与三(2 ‑羧乙基)膦混合孵育， 得到混合 物1， 然后将步骤S2制备得到的拉曼报告分子标记的金纳米加入混合物1中孵育过夜， 得到 混合物2， 再在24小时内将PBS逐渐添加到混合物2中， 再用双蒸水洗涤， 去除未结合的DNA， 制备得到DNA功能化的SERS探针； S4 DNA功能化的表面修饰链霉亲和素的磁珠的制备： 将DNA探针2与表面修饰链霉亲和 素的磁珠混合孵育， 在室温下振荡， 并用纯净水洗涤后， 分散到PBS中， 得到DNA功能化的表 面修饰链霉亲和素的磁珠； S5 SERS探针生物传感器的制备： 将步骤S3制备得到的DNA功能化的SERS探针分散到步 骤S4制备得到的DNA功能化的表面修饰链霉亲和素的磁珠中， 再加入适配体， 并在室温下一 起孵育过夜， 用纯 净水洗涤后， 得到 Y型SERS探针生物传感器。 5.根据权利要求4所述的SERS探针生物传感器的制备方法， 其特征在于， 所述DNA探针 1、 DNA探针2和适配体在使用前还包括预处理步骤： 将DNA探针1、 DNA探针2和适配体分散在 TE缓冲液中， 并在水浴中加热至95℃5分钟， 然后将其冷却 至室温并储存在4℃以供进一步 使用。 6.根据权利要求4所述的SERS探针生物传感器的制备方法， 其特征在于： 所述步骤S3 中， DNA探针1与三(2 ‑羧乙基)膦的体积比为10:1， 摩尔比为1:20 00。 7.根据权利要求4所述的SERS探针生物传感器的制备方法， 其特征在于： 所述步骤S4 中， DNA探针2与表面 修饰链霉亲和素的磁珠的体积比为1:2， 摩尔比为10 0:3。 8.根据权利要求4所述的SERS探针生物传感器的制备方法， 其特征在于： 所述DNA探针 1、 DNA探针2和适配 体的浓度及 摩尔量都相等。 9.一种使用权利要求1 ‑3任一项所述的SERS探针生物传感器检测急性肾损伤中蛋白质 生物标志物的方法， 其特征在于， 包括： 将样 品和SERS探针生物传感器混合孵育， 然后 分离权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114739976 A 2上清液， 检测上清液中是否含有SERS信号。 10.根据权利要求9所述的SERS探针生物传感器检测急性肾损伤中蛋白质生物标志物 的方法， 其特征在于： 所述蛋白质生物标志物的检测为中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白 (NGAL)和胱抑素C(Cys  C)的双重检测。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114739976 A 3