ICS 65.020.01 CCS B05 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2445—2021 向日葵黄萎病田间抗性鉴定技术规程 Technical code of practice for resistant identification to sunflower Verticillium wilt in field 2021-11-15 发布 2021-12-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2445—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。 本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区科学技术战略研究中心。 本文件主要起草人：周洪友、王东、张键、赵君、孟焕文、张笑宇、乔旭。 I DB15/T 2445—2021 向日葵黄萎病田间抗性鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了向日葵黄萎病抗性鉴定的前期准备、鉴定程序、结果的计算、黄萎病抗性评价等技术 要求。 本文件适用于内蒙古自治区向日葵产区。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4407.2 经济作物种子 第2部分：油料类。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 向日葵黄萎病 sunflower Verticillium wilt 由大丽轮枝孢菌引起的一种土传病害。田间的症状多从植株下层叶片显症，叶尖叶肉部分呈现褪绿、 黄化的症状。随后，病部边缘向叶内的脉间组织发展导致整个叶片的叶肉组织褪绿，变褐，干枯。发病 重的植株下部叶片全部枯死，中位叶片呈斑驳状。剖开病茎观察，可见茎部的维管束变褐。 4 前期准备 4.1 病原菌的选择与培养 4.1.1 病原菌的选择 根据所鉴定品种推广应用区域选择能代表该区域病原菌致病力水平的优势菌系。 4.1.2 病原菌的培养 在超净台上，将分离纯化的向日葵黄萎病菌，从PDA平板上的菌落边缘挑取直径5 mm的新鲜菌块， 接种到查比克液体培养基（NaNO3：2.0 g；K2HPO4：1.0 g；KCl：0.5 g；MgSO4•7H2O：0.50 g；FeSO4:0.01 g；蔗糖:30.0 g；用水定容至1000 mL）中，置于25 ℃下，150 r/min，黑暗培养6 d备用。 制作麦麸培养基，加入适量的水，装入三角瓶,0.1 MPa，高压湿热灭菌30 min，冷却到室温备用； 吸取上述液体培养的向日葵黄萎病菌菌液15 mL 转接至装有麦麸沙粒培养基的三角瓶中，随后放入到 25 ℃培养箱中静置培养7 d，待黄萎病菌的菌丝布满后，将培养物掏出，自然条件下风干备用。 1 DB15/T 2445—2021 4.2 病圃的建立 向日葵黄萎病病圃应建立在有利于黄萎病发生的地区，选择具有一定隔离条件的地块建立病圃，病 圃地势平坦，土壤以沙壤土为宜。按每平方米45 g的接种量，将培养好的菌种均匀地撒入病圃，再翻耕 2～3遍，使病菌与土壤混合均匀，使正常年份感病对照的病情指数达到35.0以上。 4.3 对照品种的选择 鉴定中选用一个感病对照和一个抗病对照。感病对照要求高度感病，选择标准为正常年份病情指数 能达到35.0左右，且感病性稳定；抗病对照选用已推广应用的抗黄萎病品种，且抗病性稳定。 5 鉴定程序 5.1 材料的处理 鉴定的向日葵品种或材料应为未包衣的种子，发芽率应符合GB 4407.2。 5.2 材料的种植 鉴定材料种植在病圃中，随机区组设计，3次重复，每小区2垄4行、行长不少于5 m、株数不少于50 株，适当提早播种。 5.3 鉴定圃田间管理 播种后，确保全苗，保持田间的适宜湿度，以利于黄萎病的发生，各项田间管理保持一致。 5.4 病情的调查记载 向日葵出苗后，实时监测感病对照的发病情况，当感病对照病情指数高于35.0时，进行第一次全面 调查，每10 d左右调查一次，整个生育期调查次数不少于3次。感病对照病情指数低于35.0时，鉴定无 效。在病情调查记载中采用5级法表述病情。根据植株黄萎病发生严重程度分成1～5五个病级，代表值 分别为0～4： a) 1 级（代表值 0）：植株健康，无病叶，生长正常； b) 2 级（代表值 1）：植株三分之一以下叶片表现病状； c) 3 级（代表值 2）：植株三分之一以上，三分之二以下叶片表现病状； d) 4 级（代表值 3）：植株三分之二以上叶片表现病状； e) 5 级（代表值 4）：植株枯死。 6 结果的计算 6.1 病株率（Ri） 见公式（1）： 式中： 2 DB15/T 2445—2021 ni——发病株数； nt——总株数。 6.2 病情指数（DI） 见公式（2）： 式中： dc——相应病级； nc——各病级病株数； nt——总株数。 6.3 相对病情指数 将感病对照病情指数进行标准化，以标准病情指数（50.0）对试验品种病情指数进行校正，校正结 果即为相对病情指数。感病对照病情指数在35.1～65.0之间可采用相对病情指数，超出范围不宜采用相 对病情指数。 校正系数（K）： 式中： 50.0——感病对照标准病情指数； DICK——本次鉴定感病对照病情指数。 相对病情指数（RDI）： 式中： DI——被鉴定品种病情指数； K ——校正系数。 7 黄萎病抗性评价 7.1 相对病情指数均值 整个生育期每次（不少于3次）调查结果的相对病情指数算术平均值，作为供试品种的最终相对病 情指数。 相对病情指数均值（ARDI）： 式中： RDIi——第 i 次相对病情指数； n——整个生育期计算相对病情指数的次数。 3 DB15/T 2445—2021 7.2 抗性鉴定结论 根据被鉴定品种的相对病情指数均值（ARDL）的大小评定品种的抗性级别，抗性级别的划分标准见 附录A。 4 DB15/T 2445—2021 A A 附 录 A （规范性） 向日葵品种抗性级别的划分标准 向日葵品种抗性级别的划分标准见表A.1。 表A.1 向日葵品种抗性级别的划分标准 级别 抗性类别 英文缩写 相对病情指数均值 1 免疫 I ARDI=0 2 高抗 HR 0＜ARDI≤10.0 3 抗病 R 10.1＜ARDI≤20.0 4 耐病 T 20.1＜ARDI≤35.0 5 感病 S ARDI＞35.0 5