ICS 65.020.20 B 31 DB64 宁夏回族自治区地方标准 DB 64/ T1632—2019 茗葱种苗组培操作技术规程 地方标准信息服务平台 2019-02-12发布 2019-05-12实施 宁夏回族自治区市场监督管理厅 发布 地方标准信息服务平台 DB64/ T1632—2019 前言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏回族自治区农业农村厅归口。 本标准起草单位：宁夏农林科学院种质资源研究所，宁夏农林科学院农业生物技术研究中心。 本标准主要起草人：张丽娟、曲继松、窦云萍、朱金霞、唐铭、朱倩楠、李。 地方标准信息服务平台 地方标准信息服务平台 DB64/T1632—2019 落葱种苗组培操作技术规程 1范围 本标准规定了葱种苗组培快繁的材料的采集、不定芽诱导、增殖培养、生根培养、穴盘苗生产及 管理、穴盘苗质量标准等技术要素 本标准适用于落葱种苗的组培快繁技术管理的全过程。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 NY/T2306-2013花卉种苗组培快繁技术规程 3术语与定义 下列术语和定义适用于本文件 3. 1 菩葱(A/liumvictoria/isL.) 别名寒葱、鹿耳葱、隔葱等，为百合科（Liliaceae）葱属(Allium)多年生草本植物，地上部植株可供 食用，为一种药食兼用的珍稀山野菜。 4培养基制作方法 4.1准备 根据培养基成分准备好去离子水、琼脂、蔗糖和各类母液以及容器、器材、设备等，培养基主要成 分和化学试剂的质量，以及所用容器、器材和设备的技术参数符合NY/T2306-2013的要求。 4.2定容 慧服务平台 在1L的容器中，按照附录A中要求分别加入MS培养基、琼脂、蔗糖，再根据要求加入激素，然后加 入700mL～800mL去离子水，边加热边搅拌至均匀，加去离子水至1L。 4.3pH值测定 充分搅拌后，用pH试纸测pH值，用0.1mol/L的HC1或0.1mol/L的NaOH调节pH值至5.8。 4.4分装 将培养基分装在350mL的培养瓶中，每升分装20瓶～25瓶，每瓶分装约40mL～50mL。 4.5封口 1 DB64/T1632—2019 盖好带透气膜的瓶盖。 4.6灭菌 用立式压力蒸汽灭菌器在0.11Mpa～0.12Mpa下，121℃灭菌15min。 4.7贮存 灭菌后的培养基放在干净、卫生的接种室内，温度20℃以内避光贮存时间不应超过15d。 5材料采集 5.1母株选择 选择无病虫害，生长健壮的葱植株为母株。 5.2试验材料采集 5.2.1采集时间 客葱早春萌发后（3月中旬萌发）1个月内挖取客葱全株，或秋冬休眠后挖取地下根茎，放入4℃ 冰箱保存2个月后移植至温室内，出苗后20d～25d再取样，选择晴天天气采集外植体。 5.2.2采集方法 挖取落葱全株，抖掉大部分泥土，用保鲜袋密封带回实验室。 5.3外植体消毒 先用自来水冲去落葱植株上的灰尘和泥土，用软毛刷配合洗洁精溶液刷洗植株表面，除去附着在表 面的杂菌，剪去叶和鳞茎盘上的须根，留下带鳞茎盘的鳞茎1.0cm1.5cm，流水冲洗30min～40min， 再用洗洁精或洗衣粉水浸泡并放于振荡器中振荡清洗30min，用去离子水冲洗5次。在超净工作台中， 用75%酒精将外植体消毒30s，无菌水漂洗1次2次。之后转入0.1%HgCl2(升汞)中消毒8min，再用无 菌水漂洗5次～6次，每次1min～2min，最后转移至消毒后的无菌滤纸上，吸干表面水分。 5.4外植体切割 在无菌滤纸上，用消毒灭菌后的手术刀、镊子等用具切除与消毒液接触的伤口部位，剥掉落葱鳞茎 的外层，只留内部1层～2层嫩茎，切割成5mm～8mm的切段（带整个或部分鳞茎盘），备用。 信息服务平台 6不定芽诱导 6.1不定芽诱导培养基配方 落葱鳞茎不定芽诱导培养基参见附录A。 6.2接种与转接 6.2.1接种 将切割好的菩葱鳞茎外植体，接种到不定芽诱导培养基上（附录A），诱导不定芽生长，每瓶接种 2块～3块。 2 DB64/T1632—2019 6.2.2培养条件 温度控制在20℃～23℃，光照条件为：首先暗培养（14d左右），芽诱导出后，转为光照15001x～ 30001x，光照时间12h/d～14h/d。 6.2.3转接 接种30d～40d后，将不定芽转接至新的不定芽生长培养基（附录A）进行继代培养。 7增殖培养 7.1 增殖培养基 增殖培养基见附录A，培养基按3.2中方法进行制作。 7.2增殖转接 7.2.1转接方法 不定芽培养60d后，将基部分化出的丛生芽切割成单芽，转接到增殖培养基上进行增殖培养。切分 丛芽时，应避免产生过多和过大的伤口 7.2.2注意事项 废弃污染、白化、玻璃化的增殖苗。 7.3培养条件 增殖培养的光照时间16h，温度及光照强度与不定芽诱导相同。 7.4培养周期 葱的增殖周期为30d～40d，及时将培养材料转接至新的增殖培养基。 地方标准信影 8生根培养 8.1生根培养基 落葱生根培养基参见附录A，培养基按3.2中方法进行制作 8.2生根苗 *服务平台 8.3培养条件 光照时间16h/d。生根培养的温度和光照强度与不定芽诱导相同。 9 穴盘苗生产及管理 9.1炼苗 3