(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221090496 6.2 (22)申请日 2022.07.29 (71)申请人 张弩 地址 510080 广东省广州市中山 二路58号 中山大学附属第一医院 院长办公室 (72)发明人 张弩　闫超　姚宏伟　 (74)专利代理 机构 北京智丞瀚方知识产权代理 有限公司 1 1810 专利代理师 姜司晨 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) G01N 33/574(2006.01) G01N 33/68(2006.01) C07K 14/47(2006.01) A61K 45/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治 疗KRAS基因突变相关疾病中的应用 (57)摘要 本申请提供一种以蛋白为作用对象的方法 在诊断和治疗K RAS基因突变相关疾病中的应用， 所述方法是通过检测 蛋白的表达以达到诊断疾 病的目的， 或通过抑制或消除蛋白的活性、 减少 或去除蛋白以达到治疗疾病的目的。 本发明的有 益效果为， 以蛋白为作用对象的方法在诊断和治 疗KRAS基因突变相关疾病中的应用， 其中的蛋白 (RASON)已被证实会在恶性肿瘤、 尤其是KRAS基 因突变诱导的恶性肿瘤中过表达， 因此， 将该蛋 白应用于诊断、 治疗恶性肿瘤的产品中， 能够有 效的利用其自身特性对恶性肿瘤进行诊断和治 疗， 市场应用前 景广阔。 权利要求书2页 说明书17页 附图12页 CN 115058519 A 2022.09.16 CN 115058519 A 1.一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用， 其特 征在于， 所述方法是通过检测蛋白的表达以达到诊断疾病的目的， 或通过抑制或消除蛋白 的活性、 减少或去除蛋白以达 到治疗疾病的目的。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述蛋白由SEQ  ID No： 1所示的氨基酸序 列组成； 或是在SEQ  ID No： 1所示的氨基酸序列中添加、 替换或缺失1 ‑n个氨基酸形成具有相同 功能的蛋白， n 为正整数； 或在SEQ ID No： 1所示的蛋白的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白； 或是与SEQ  ID No： 1所示的氨基酸序列具有75％以上同源性且具有相同功能的蛋白。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 编码所述蛋白的基因由SEQ  ID No： 2所示 的核苷酸序列组成； 或是在SEQ  ID No： 2所示的核苷酸序列组成中添加、 替换或缺失1 ‑n个碱基生成的核苷 酸序列， n 为正整数； 或是与SEQ  ID No： 2所示的核苷酸序列具有75％以上同源性且具有相同功能的基因。 4.根据权利要求1 ‑3任一所述的应用， 其特 征在于， 所述方法包括： 1)检测或抑制权利要求2所述蛋白的表达的方法； 2)使权利要求2所述蛋白失活的方法； 3)检测或干扰权利要求3所述基因的转录和翻译的方法； 4)使权利要求3所述基因失活的方法。 5.根据权利要求 4所述的应用， 其特 征在于， 所述方法包括： 能够检测权利要求2所述蛋白表达的抗体检测方法、 能够检测权利要求3所述基因转录 的PCR方法、 能够 去除权利要求3所述基因的基因编辑方法、 能够去除权利要求3所述基因中 编码权利要求2所述蛋白的ORF的全部序列或部分序列或使其产生移码突变序列的基因编 辑方法、 能够减少或去除权利要求3所述基因转录的RNA的RNAi方法、 能够减少或去除权利 要求3所述基因转录的RNA中编码 权利要求2所述蛋白的ORF序列的RNAi方法、 能够抑制权利 要求3所述基因转录的RNA的抑制方法、 能够降解权利要求3所述基因转录的RNA的降解方 法、 能够抑制权利要求2所述蛋白或抑制权利要求2所述蛋白与RAS结合的抑制方法、 能够降 解权利要求2所述蛋白的降解方法。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特 征在于， 所述siRNA的核苷酸序列如序列表中SEQ  ID No： 4‑SEQ ID No： 15的任意 一种所示； 所述shRNA表达质粒基于序列表中SEQ  ID No： 4‑SEQ ID No： 15的任意一种所示的序列 构建， 构建过程为： 通过启动子启动shRNA的表达， 并将shRNA表达序列构建至表达载体中得 到； 所述gRNA的靶序列如序列表中SEQ  ID No： 16‑SEQ ID No： 90的任意 一种所示。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述基因编辑方法为CRISPR/Cas9基因编 辑方法。 8.根据权利 要求7所述的应用， 其特征在于， 所述KRAS基因突变相关疾病为与KRAS基因 突变相关的恶性肿瘤。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述与KRAS基因突变相关的恶性肿瘤包权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115058519 A 2括： 胰腺癌、 结肠癌、 肺癌、 胃癌、 胆管癌、 子宫内膜癌、 睾丸生殖细胞癌、 宫颈癌、 皮肤癌、 多 发性骨髓瘤和胶质瘤。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述KRAS基因突变包括： KRASG12A、 G12C、 G12D、 G12F、 G12R、 G12S、 G12V、 G12Y、 G13C、 G13D、 G15C、 Q22K、 S39Y、 A59T、 G60D、 Q61H、 Q61L、 Q61R、 Y64H、 A146T、 A146V突变中的至少一种。 11.根据权利要求1 ‑10所述的应用， 其特征在于， 所述方法中还包含有可联合使用的其 他能够用于诊断或治疗与KRAS基因突变相关疾病的药物、 制剂、 方法。 12.如权利要求11所述的应用， 其特征在于， 所述可联合使用的药物或制 剂为针对KRAS 基因突变的靶向小分子抑制剂或针对癌症的靶向小分子药物。 13.如权利要求12所述的应用， 其特征在于， 所述针对KRAS基因突变的靶向小分子抑制 剂为AMG 510、 MRTX849、 RMC ‑4630、 BI 1701963、 MR  TX1133； 所述针对癌症的靶向小分子药 物为EGFR小分子靶向药物、 抗EGFR单克隆抗体药物、 泛 ‑ERBB抑制剂或RAS信号通路相关抑 制剂； 所述RAS信号 通路相关抑制剂为靶向FGFR、 RAF、 M EK、 ERK、 PI3K、 AKT、 RAL的抑制剂。 14.如权利要求11所述的应用， 其特征在于， 所述可联合使用的方法为阻断肿瘤逃逸机 制的方法。 15.如权利要求14所述的应用， 其特征在于， 所述阻断肿瘤逃逸机制的方法中， 用于阻 断肿瘤逃逸机制的抑制剂为泛 ‑ERBB抑制剂或RAS信号通路相关抑制剂； 所述RAS信号通路 相关抑制剂为靶向FGFR、 RAF、 M EK、 ERK、 PI3K、 AKT、 RAL的抑制剂。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115058519 A 3