(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211185881.X (22)申请日 2022.09.27 (71)申请人 百缮药业 （苏州） 有限公司 地址 215123 江苏省苏州市苏州工业园区 星湖街218号A1楼E284单 元 (72)发明人 於四杰　李永安　刁刘洋　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 专利代理师 刘二艳 (51)Int.Cl. C12P 17/18(2006.01) C07D 487/14(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 一种AFA衍 生物的制备方法及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种AFA衍生物的制备方法及 其应用， 所述制备方法包括： 将重组质粒转入大 肠杆菌， 得到重组大肠杆菌， 活化后， 将菌株、 培 养基、 诱导剂与原料化合物混合， 诱导培养， 得 发 酵液， 萃取， 即得所述AFA衍生物； 所述重组质粒 携带编码L ‑色氨酸氧化酶VioA、 CPA合成酶VioB、 单加氧酶RebP和单加氧 酶RebC的核苷酸序列。 本 发明首次提供了一种快速、 方便、 低成本合成AFA 的衍生物的方法， 对于新型、 特异性好、 毒性小的 抗癌药物的筛 选和研发而言具有重要的意 义。 权利要求书3页 说明书12页 附图6页 CN 115505609 A 2022.12.23 CN 115505609 A 1.一 种A F A 衍 生 物的 制备 方 法 ， 其 特 征 在 于 ， 所 述 A F A 衍 生 物的 结 构为 所述R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 R6、 R7和R8各自独立地选自H、 CH3、 OH、 OCH3、 F、 Cl、 Br、 NH2、 CN或NO2中 的任意一种， 且其中至少一种不 为H； 所述制备方法包括： 将重组质粒转入大肠杆菌， 得到重组大肠杆菌， 活化后， 将菌株、 培 养基、 诱导剂与原料化 合物混合， 诱 导培养， 得发酵 液， 萃取， 即得 所述AFA衍 生物； 所述重组质粒携带编码L ‑色氨酸氧化酶VioA、 CPA合成酶VioB、 单加氧酶RebP和单加氧 酶RebC的核苷酸序列； 所述原料化 合物的结构为 所述R9、 R10、 R11和R12各自独立地选自H、 CH3、 OH、 OCH3、 F、 Cl、 Br、 NH2、 CN或NO2中的任意一 种， 且其中至少一种不 为H。 2.如权利要求1所述的AFA衍生物的制备方法， 其特征在于， 所述AFA衍生物选自4F ‑ AFA、 4,4'F ‑AFA、 5F‑AFA、 5,5'F ‑AFA、 5Br‑AFA、 5,5’Br‑AFA、 7Cl‑AFA或7,7 ’Cl‑AFA中的任意 一种， 分别依次对应如下 结构： 权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115505609 A 2所述原料化 合物具有任意 一种如下 结构： 3.如权利要求1或2所述的AFA衍生物的制备方法， 其特征在于， 所述重组质粒包括 pETDuet系列、 pACYCDuet系列、 pRSFDuet系列、 pCOLADuet或pCDFDuet系列表达载体中的任 意一种； 优选地， 所述重组质粒包括pCDFDuet ‑1_vioAvioBrebPrebC； 优选地， 所述大肠杆菌包括大肠杆菌BL21(DE 3)。 4.如权利要求1 ‑3中任一项所述的AFA衍生物的制备方法， 其特征在于， 所述培养基包 括M9培养基； 优选地， 所述 诱导剂包括 IPTG； 优选地， 所述 IPTG的加入量 为0.3‑0.5mM； 优选地， 所述原料化 合物的加入量 为3‑5mM。 5.如权利要求1 ‑4中任一项所述的AFA衍生物的制备方法， 其特征在于， 所述诱导培养 的温度为15 ‑25℃， 所述 诱导培养的时间为3 6‑48h。 6.如权利 要求1‑5中任一项所述的AFA衍生物的制备方法， 其特征在于， 所述活化包括： 将重组大肠杆菌 接种至LB培 养基中进行活化培 养； 优选地， 所述活化培 养的温度为3 3‑40℃。 7.如权利要求1 ‑6中任一项所述的AFA衍生物的制备方法， 其特征在于， 所述萃取中使 用的萃取 试剂包括乙酸乙酯； 优选地， 所述萃取在15 ‑40℃下进行； 优选地， 所述萃取前还包括对发酵液进行加热， 所述加热的温度为80 ‑90℃， 所述加热 的时间为10 ‑20min。 8.如权利 要求1‑7中任一项所述的AFA衍生物的制备方法或由所述制备方法得到的AFA 衍生物在制备抗癌药物中的应用。 9.如权利 要求1‑7中任一项所述的AFA衍生物的制备方法或由所述制备方法得到的AFA 衍生物在制备激酶抑制剂中的应用。 10.如权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述激酶抑制剂包括FLT3ITD抑制剂、 PIM1 抑制剂、 PIM3抑制剂、 MAP4K3抑制剂、 IRAK4抑制剂、 PAK 1抑制剂或CDK7/CycH/MAT1抑制剂中 的任意一种或至少两种的组合； 优选地， 当所述AFA衍生物为4F ‑AFA时， 所述激酶抑制剂为FLT3ITD抑制剂、 PIM1抑制 剂、 PIM3抑制剂、 MAP4K3抑制剂、 IRAK4抑制剂或PAK1抑制剂中的任意一种或至少两种的组 合； 优选地， 当所述AFA衍生物为7Cl ‑AFA时， 所述激酶抑制剂为FLT3ITD抑制剂和/或PIM1 抑制剂； 优选地， 当所述AFA衍生物为5Br ‑AFA时， 所述激酶抑制剂为FLT3ITD抑制剂和/或PIM1 抑制剂；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115505609 A 3